Determinação de AEA e 2-AG em amostras de plasma por Bio-SPME-Nano-ESI

Resumo

Endocanabinóides (ECs) atuam sobre os receptores canabinóides, tais como CB1 e CB2 e há uma grande variedade de interações entre o sistema receptor CB1 com diversos neurotransmissores e neuromoduladores no sistema nervoso central e periférico. A multiplicidade das funções atribuídas aos ECs, torna-os um alvo emergente da farmacoterapia para um grande número de doenças. Os dois ECs mais importantes são a anandamida (AEA) e o 2-araquidonoil glicerol (2-AG), sendo uma tarefa árdua a determinações de AEA e 2-AG em matrizes biológicas, pelo fato desses compostos existirem em baixas concentrações, possuem baixa estabilidade química e ao baixo volume de amostra disponível. A principal característica da espectrometria de massas com ionização ambiente (em inglês Ambient Mass Spectrometry, AMS) é a capacidade de análise com mínima ou sem nenhuma preparação de amostra. No entanto a pura ionização ambiente apresenta limitações previsíveis para análise de matrizes complexas, com a supressão da ionização, baixa sensibilidade em níveis de traços e estreita faixa linear dinâmica. Para solucionar este inconveniente, é desejado o desenvolvimento de métodos que integram de forma eficiente a etapa de preparo de amostra e de ionização. As fibras de micro extração em fase solida biocompatíveis (em inglês Solid Phase Micro Extraction, SPME) permitem a extração de pequenas moléculas em matrizes biológicas por imersão direta (em inglês Direct Immersion, DI), impedindo a adsorção de macromoléculas junto a fase estacionária. Baseado na significativa vantagem do direto acoplamento das fibras SPME biocompatíveis com a espectrometria de massas por ionização via "nanoelectrospray", este projeto propõe o uso de Bio-SPME-Nano-ESI para a determinação de AEA e 2-AG em amostras de plasma de pacientes com doenças neurológicas. A otimização do processo de extração/enriquecimento e ionização dos analitos será realizada através da técnica de planejamento experimental (em inglês Design of Experiments, DOE). A validação analítica do método Bio-SPME-Nano-ESI será realizada de acordo com os critérios estabelecidos pelo FDA.