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Desenvolvimento de métodos de microextração hifenados à LC-MS/MS ou diretamente à MS/MS para a determinação de biomarcadores em amostras biológicas de pacientes ou de ratos com doenças neurodegenerativas

Resumo

O diagnóstico conclusivo das doenças neurodegenerativas, como a doença Parkinson (DP) e a doença Alzheimer (DA), tem sido eminentemente clínico e, nesses casos, a neurodegeneração já se instalou no cérebro do paciente. Portanto, esforços têm sido realizados para encontrar um biomarcador molecular para a identificação de pacientes em risco de desenvolver estas doenças, bem como para o diagnóstico precoce e acompanhamento da progressão destas neurodegenerações. A cromatografia líquida de alta eficiência acoplada à espectrometria de massas em tandem (LC-MS/MS) tem sido considerada a técnica analítica de referência para a determinação de biomarcadores em fluidos biológicos. Em razão da complexidade dos fluidos biológicos, os métodos LC-MS/MS requerem a etapa de preparo de amostras para a eliminação das macromoléculas da matriz biológica e concentração dos analitos (níveis de traços). As técnicas de preparo de amostras biológicas têm sido simplificadas, miniaturizadas (menor volume de amostra e de consumo de solvente orgânico) e/ou hifenizadas com sistemas cromatográficos, automação (high-throughput performance). Neste contexto, podemos destacar a microextração líquido-líquido assistida por salting-out, (micro SALLE) e a microextração em fase sólida no capilar (in-tube SPME) hifenada à LC-MS/MS. O desenvolvimento de capilares com fases estacionárias inovadoras bifuncionais para a técnica in-tube SPME, como as fases monolíticas orgânicas com materiais de acesso restrito (RAM) e líquidos iônicos polimerizáveis (PIL) zwiteriônicos, tem permitido a pré-concentração seletiva dos analitos. Neste projeto, para a avaliação dos potenciais biomarcadores da DA, os seguintes métodos serão desenvolvidos para análises de amostras de plasma e de líquido cefalorraquidiano: (a) in-tube SPME-LC-MS/MS com capilar com fase monolítica orgânica com grupos sulfônicos e revestimento RAM para a determinação de peptídeos ²-amilóides, (b) in-tube SPME-MS/MS com capilar de poliéter(éter)cetona (PEEK) recheado com fibras de nitinol (suporte SPME de última geração) recobertas quimicamente com fase estacionária de líquidos iônicos poliméricos zwiteriônico (ZILs) para a determinação de peptídeos ²-amilóides e (c) in-tube SPME-LC-MS/MS com capilar com fase monolítica orgânica com grupos trocadores de cátions e revestimento RAM para a determinação de homocisteína e ácido homocisteico. Já para a avaliação dos potenciais biomarcadores da DP, o método micro SALLE/LC-MS/MS será desenvolvido para a determinação de anandamida (AEA) e 2-araquidonoilglicerol (2-AG) em encéfalos de ratos induzidos ao parkinsonismo, tratados ou não com L-Dopa. Portanto, em congruência ao estado da arte das técnicas miniaturizadas de extração e de separação, este projeto terá grande valia na área de neurociências. (AU)

Publicações científicas
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
CARVALHO OLIVEIRA, IGOR GUSTAVO; DE SOUZA, ISRAEL DONIZETI; DO NASCIMENTO, GLAUCE CRIVELARO; DEL BEL, ELAINE; COSTA QUEIROZ, MARIA EUGENIA. In-tube solid-phase microextraction directly coupled to tandem mass spectrometry for anandamide and 2-arachidonoylglycerol determination in rat brain samples from an animal model of Parkinson's disease. Journal of Chromatography A, v. 1636, JAN 11 2021. Citações Web of Science: 0.

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