Estudos sobre mecanismos de diferenciação celular durante o desenvolvimento embrionário inicial em bovinos

Resumo

Os primeiros eventos de diferenciação celular em mamíferos ocorrem antes da implantação embrionária. Estes consistem na separação entre a massa celular interna e o trofectoderma, seguida pela separação entre epiblasto e endoderma primitivo dentro da massa celular interna. Os mecanismos moleculares que controlam essa diferenciação podem envolver desde polarização celular à expressão temporal de fatores de transcrição específicos. Dados recentes indicam que o desenvolvimento embrionário inicial bovino seria um bom modelo para humanos. O presente projeto visa estudar diferentes mecanismos que possam estar relacionados a diferenciação das primeiras linhagens celulares no desenvolvimento do embrião. São propostos experimentos para testar hipóteses relacionadas ao primeiro e segundo eventos de diferenciação celular embrionária. Pretende-se avaliar a influência da polarização celular e a atividade da via de sinalização Hippo na segregação de massa interna celular e trofectoderma; para depois tentar identificar fatores pontuais que controlem esse evento. Será também testada a participação dos fatores de transcrição NANOG eGATA6 na separação do epiblasto e endoderma primitivo. Os experimentos envolverão o uso de moléculas inibidoras, edição gênica mediada por CRISPR/Cas9 e avaliação global da expressão gênica de células individualizadas. Espera-se com este projeto obter uma maior compreensão dos mecanismos envolvidos nas primeiras decisões de diferenciação do embrião bovino. O maior conhecimento desses mecanismos pode auxiliar no entendimento de problemas associados às técnicas de fertilização in vitro, clonagem e cultivo de células pluripotentes. (AU)