Avaliação do gene EPHA5 nos efeitos da neuropatia periférica induzida pelo paclitaxel em neurônios sensoriais derivados de células-tronco pluripotentes induzidas

Resumo

Paclitaxel é um antineoplásico frequentemente eficaz na primeira linha de tratamento para o câncer de ovário, mama, pulmão e próstata. No entanto, a dose cumulativa deste fármaco ocasiona a neuropatia periférica sensorial. Os primeiros Genome Wide Association Studies (GWAS) realizados sobre neuropatia periférica induzida pelo paclitaxel (NPIP) identificaram uma variante genética no gene do receptor de ephrin EPHA5 associado ao aumento do risco de desenvolver essa toxicidade. Além disso, a aplicação de tecnologia de células-tronco pluripotentes induzidas (iPSC) possui o potencial de avanços rápidos na compreensão do NPIP em nível molecular. A proposta deste estudo é avaliar a relevância do gene EPHA5 nos mecanismos moleculares subjacentes da NPIP, usando um novo modelo de neurônio sensorial derivado de células-tronco pluripotente induzidas. Para avaliar os efeitos do paclitaxel no alvo celular da toxicidade, as linhagens de células-tronco pluripotentes induzidas por isogênese humano serão diferenciadas nos neurônios sensitivos do nociceptor (iPSC-SNs). A tecnologia CRISPRi e agentes farmacológicos serão utilizados para inibir a EPHA5 e as GTPasas Rho e avaliar os efeitos na morfologia dos neurites. Todos os experimentos serão repetidos no mínimo três vezes e em triplicata. Os efeitos dependentes da dose de paclitaxel em medidas quantitativas da morfologia de neurites, EPHA5 e Ephexin-1 serão testados quanto à significância (P <0.05) utilizando ANOVA seguido do test de Dunnett.