Estudo dos mecanismos fisiopatológicos dos transtornos psiquiátricos na doença de Fabry

Resumo

Doença de Fabry (DF) é um erro inato do metabolismo causado por mutações no gene GLA (GLA; OMIM * 300644), localizado no cromossomo X. Defeitos nesse gene levam a deficiência da ±-galactosidase A (alfa-Gal A; EC 3.2.1.22), responsável por degradar glicoesfingolipídeos, principalmente globotriaosilceramida (Gb3). A ±-Gal A está presente em todos os tecidos, logo, a deficiência dessa enzima resulta em uma doença multissistêmica progressiva. A DF abrange um amplo espectro fenotípico clínico, afetando principalmente sistemas cardíaco, renal, gastrointestinal e cerebrovascular. Sintomas neuropsiquiátricos estão sendo repetidamente descritos em pacientes com DF; no entanto, as bases fisiopatológicas da DF no sistema nervoso central são pouco conhecidas, portanto, não está claro se os sintomas psiquiátricos são causados pela doença ou se são secundários à mesma. Propomos aqui desenvolver um modelo in vitro para estudar a fisiopatologia da DF em neurônios. Primeiramente, usaremos a técnica de CRISPR Cas9 para editar células SH-SY5Y, uma linhagem capaz de se diferenciar em neurônios. Essas células serão caracterizadas quanto a eficiência da indução das mutações no gene GLA e ausência de off-targets, bem como para a deficiência da atividade enzimática da ±-Gal A. Em seguida as células serão diferenciadas em neurônios, sendo que o acúmulo de Gb3, bem como a sobrevida celular serão avaliados. Por fim, será realizado o transcriptoma das células editadas e selvagens a fim de analisar o possível impacto da deficiência da ±-Gal A em neurotransmissores, receptores, bem como na expressão de mRNAs relacionados a proteínas que estão alteradas em transtornos psiquiátricos.