Influência de variantes em genes de vias imunológicas no risco e prognóstico de pacientes com melanoma cutâneo

Resumo

O melanoma cutâneo (MC) merece destaque entre os tumores devido a sua mortalidade elevada. O sucesso da imunoterapia em pacientes com MC indica que o sistema imune atua no controle do tumor. Recentemente, variantes genéticas de base única (SNVs) na via PD1 foram associadas por nosso grupo ao risco e prognóstico do MC. É bem possível que SNVs em genes de outras vias do sistema imune tenham importância similar ou maior na origem e progressão do tumor. Pretendemos avaliar neste estudo a associação de SNVs no gene TNFRSF1B (c.*215C>T, c.*188A>G, c.*922C>T e c.587T>G) da via tumor necrosis factor receptor 2 (TNFR2), HAVCR2 (c.-574A>C, c.-882G>A, c.-1766C>A e c.*931A>G) da via T cell immunoglobulin and mucin-domain containing-3 (TIM-3) e JAK1 (c.1648+1272G>A, c.991-27C>T), JAK2 (c.-1132G>T, c.-139G>A) e STAT3 (c.*1671T>C, c.-1937C>G) da via janus kinase signal transducer of activation (JAK/STAT) do sistema imune com o risco de ocorrência, aspectos clinicopatológicos e prognóstico de pacientes com MC. Serão avaliados 300 pacientes com MC e 300 doadores de sangue atendidos na Instituição. As informações clínicas serão obtidas por questionários específicos e acesso aos prontuários médicos. Os genótipos serão identificados por meio da reação em cadeia da polimerase (PCR) em tempo real, em DNA genômico. A expressão do gene será analisada por PCR quantitativo em RNA genômico de indivíduos com os distintos genótipos de cada SNV. Serão avaliados os papéis funcionais de uma SNV de maior interesse (aquela que apresentar associação mais consistente com risco, aspectos clinicopatológicos ou sobrevida dos pacientes) para cada um dos genes TNFRSF1B, HAVCR2 e STAT3. Se a SNV de interesse estiver localizada em região intrônica será realizado o ensaio do minigene repórter e se em região promotora ou região 3'-UTR será realizado ensaio de luciferase em linhagem celular de melanoma SK-MEL-28 modificada geneticamente para apresentar os genótipos homozigoto ancestral e homozigoto variante da SNV de interesse; citometria de fluxo para avaliar o ciclo celular e apoptose complementará os referidos ensaios. As diferenças entre grupos serão avaliadas pelo teste de Fisher ou qui-quadrado. As comparações de expressões gênicas e proteicas serão realizadas por meio dos testes t e ANOVA ou teste de Mann-Whitney e Kruskal-Wallis. As análises de sobrevida serão realizadas pelo método de Kaplan-Meier, teste do log-rank e análises univariada e multivariada de Cox. Os resultados deste estudo poderão contribuir para identificar indivíduos de alto risco para o MC ou para melanoma agressivo, que mereçam receber medidas especiais para prevenção e diagnóstico precoce do tumor ou terapêutica diferenciada. (AU)