Avaliação do efeito de uma nova cistatina derivada da cana-de-açúcar (Cane CPI-5) sobre o perfil e viabilidade de biofilme microcosmo, bem como na prevenção da desmineralização da dentina

Resumo

Na odontologia, diversas doenças como a cárie e erosão dentária têm sido estudadas. Recentemente, uma nova cistatina derivada da cana-de-açúcar (CaneCPI-5) foi produzida em sistema de expressão hieróloga e demonstrou uma alta capacidade de ligação ao esmalte, protegendo contra a erosão do esmalte in vitro. Entretanto, o efeito protetor da CaneCPI-5 contra a cárie dentária, causada por ácidos produzidos por micro-organismos estruturalmente e organizados em um biofilme, em decorrência do consumo de açúcares, nunca foi estudado. Em adição, as proteases da matriz são muito importantes para a progressão da cárie em dentina e as cistatinas, incluindo a CaneCPI-5, são inibidores de cisteíno-catepsinas, o que pode ter um efeito adicional na prevenção da cárie em dentina. O objetivo deste trabalho será avaliar o efeito de diferentes concentrações da CaneCPI-5 sobre a perfil bacteriano e viabilidade de um biofilme microcosmo, bem como na prevenção da desmineralização da dentina. Para a formação do biofilme microcosmo, será coletada a saliva de 1 indivíduo saudável, que não tenha escovado os dentes nas últimas 24h e que não tenha bebido líquidos ou ingerido alimentos nas últimas 2h. A saliva será diluída (70% saliva e 30% glicerol), e posteriormente misturada à saliva artificial de McBain (1:50) para formação do biofilme cariogênico. Amostras (4 mm x 4 mm) de dentina bovina (n=90) serão preparadas para a formação do biofilme microcosmo por 5 dias, o qual será tratado diariamente (1x60s/dia) com as concentrações de CaneCPI-5 0,1, 0,5ou 1,0 mg/ml,clorexidina 0,12% (controle positivo) e PBS (controle negativo). No Ensaio 1, as bactérias vivas e mortas no biofilme serão evidenciadas por fluorescência com microscópio confocal. No Ensaio 2, a desmineralização provocada pelo biofilme nas condições estudadas será mensurada por microradiografia transversal. Os dados serão submetidos à análise estatística apropriada (teste paramétrico ou não paramétrico, p<0,05).