Biopsia simultânea e perfil lipídico da massa celular interna e trofectoderma embrionário

Resumo

O objetivo do presente projeto é o estabelecimento da biopsia simultânea e do perfil lipídico da Massa Celular Interna (MCI) e Trofoectoderma (TE) Embrionário. Para tanto, ovário de abatedouro serão utilizados para obtenção de oóctios de qualidade, os quais serão submetidos a maturação in vitro, e fertilização in vitro (D0). Os possíveis zigotos serão cultivados in vitro para produção dos embriões. Experimento I: blastocistos expandidos D7 (n=45/grupo) serão submetidos ou não ao procedimento de biopsia das células da MCI e TE. As biopsias serão adequadamente armazenadas para posterior avaliação (imunolocalização de proteínas e perfil lipídico-MRM) e retornarão para o cultivo para o monitoramento do desenvolvimento, distribuídos da seguinte maneira: grupo 1: Bx que sofreram biopsia da MCI e TE; Grupo 2: Bx que sofreram biopsia apenas da TE; Grupo 3: Bx que não sofreram biopsia. Após 12 horas, será realizada uma análise morfológica e avaliada a taxa de re-expansão dos blastocistos biopsados (grupos 1 e 2) seguido da investigação de apoptose (TUNEL) e imunolocalização de proteínas (CDX2, GATA6 e NANOG) de todos os blastocistos (grupos 1 a 3) para avaliar o impacto das biopsias (simultânea MCI e TE, e biopsia apenas da TE) sobre o desenvolvimento, apoptose e diferenciação das diferentes linhagens celulares (trofoectoderma, epiblasto e hipoblasto). Experimento II: as células da MCI e TE biopsadas (n=15, Grupos 1 e 2) serão utilizadas para caracterização proteica da MCI e TE através da investigação da proteína CDX2. Experimento III: as biopsias da MCI e TE (grupos 1 e 2) serão agrupadas em pools de 3 biopsias por réplica (n=5 réplicas/ grupo) e submetidas a análise do perfil lipídico pelo monitoramento de reações múltiplas (perfil-MRM) em laboratório de facilidades ômicas. Para análise estatística, modelo uni e multivariados de dados serão utilizados com o auxílio de softwares estatísticos robustos capazes de avaliar uma grande quantidade de dados e fornecer respostas contundentes as hipóteses testadas. Será adotado o nível de significância de 5% (P<0,05). (AU)