Técnicas de cultivo avançadas, sequenciamento de última geração e inmunoblot aplicado ao estudo de uma espiroqueta do grupo da febre recorrente brasileira

Resumo

O interesse no estudo da febre recorrente transmitida por carrapatos começou nos inícios do século 20 na America do Sul, estendendo-se por pelo menos 50 anos. Depois deste período, a pesquisa sobre esta doença praticamente desapareceu, deixando perguntas que têm impedido o desenvolvimento de estudos usando ferramentas de pesquisa contemporâneas. O agente etiológico desta doença, a espiroquta Borrelia venezuelensis, foi recentemente isolado a partir do seu vetor, o carrapato Ornithodoros rudis, no estado do Maranhão (MA), no nordeste brasileiro. O uso de técnicas de ponta são agora necessárias para o estudo deste agente infeccioso desde um ponto de vista eco-epidemiológico no Brasil. Os objetivos do presente projeto são (1) a padronização do cultivo in vitro da B. venezuelensis RMA01 mantida congelada no nosso laboratório, (2) o sequenciamento do genoma desta bactéria e (3) o desenho de um imunoblot específico para reconhecer a circulação de anticorpos específicos para B. venezuelensis em soro de cães e humanos do MA. Para cumprir estes objetivos, B. venezuelensis RMA01 sera reativada em camundongos de laboratório e logo passada a um meio Barbour-Stoenner-Kelly modificado (mBSK). DNA extraído das borrelias cultivadas no mBSK sera cometido a sequenciamento de última geração para obter seqüências completas do cromossomo e plasmidios. Seqüências do gene bipA serão transformadas e expressadas para obter proteína BipA recombinante (rBipA). Imunoblots compostos por lisados celulares obtidos a partir das culturas e rBipA serão usados para testar a reatividade do soro de cães e humanos do MA. Os resultados deste estudo representarão o primeiro esforço para entender aspectos eco-epidemiologicos da febre recorrente transmitida por carrapatos no Brasil. As provas sorológicas aportarão evidência inédita demostrando exposição à B. venezuelensis em animais domésticos e/ou humanos no MA. O genoma da B. venezuelensis poderá trazer discernimento acurado sobre a posição filogenética desta espécie, permitindo inferir as relações evolutivas com outras espécies do gênero.