Caracterização do transcritoma de células-tronco embrionárias durante sua diferenciação em células produtoras de insulina na ausência e presença de fatores peptídicos de crescimento/diferenciação

Resumo

O Diabetes Mellitus (DM) é uma doença crônica caracterizada pela ausência da produção de insulina (T1D) ou ineficiência na sua utilização pelo indivíduo (T2D). Consequentemente, pacientes portadores de DM desenvolvem um quadro de hiperglicemia, o qual, se não for controlado, pode desencadear sérias complicações no funcionamento de órgãos vitais. Os tratamentos convencionais do T1D, na maioria das vezes, não são capazes de manter o perfeito controle dos níveis glicêmicos. Diante da crescente necessidade de busca por novas intervenções terapêuticas para o T1D, estratégias baseadas na diferenciação de células-tronco em células produtoras de insulina, têm se mostrado uma abordagem promissora. O presente trabalho propõe analisar o perfil transcritômico durante processo de diferenciação de células tronco embrionárias murinas (mESCs) e mESCs geneticamente modificadas nas quais o gene Txnip está inibido em células produtoras de insulina (IPCs), na presença de diferentes fatores peptídicos de crescimento e diferenciação celular. Utilizando metodologias padronizadas pelo laboratório, será realizado o processo de diferenciação celular na ausência e na presença de fatores peptídicos (PDGF-BB e BMP-7), visando identificar os conjuntos de genes diferencialmente expressos, através de análise de transcritoma em larga escala por RNAseq. Posteriormente, serão selecionados os transcritos mais relevantes durante o processo de diferenciação para a realização de intervenções moleculares (superexpressão e/ou nocauteamento gênico), numa abordagem de genômica funcional. Esta abordagem deverá permitir revelar as bases moleculares do processo de diferenciação de mESCs em IPCs e identificar novos alvos moleculares atuantes neste processo. Os resultados obtidos serão de grande importância para o desenvolvimento de melhores estratégias para o tratamento da DM, objetivando minimizar o risco de complicações e até morte e promover melhoria da qualidade de vida de pacientes portadores de T1D instável. (AU)