MiRNAs e polimorfismos no receptor da enzima conversora de angiotensina 2 como possíveis biomarcadores de doença induzida elo SARS-CoV-2

Resumo

O novo coronavírus (SARS-CoV-2), agente causador da Doença Coronavírus 2019 (COVID-19), se tornou a mais recente emergência mundial. Sabe-se que o SARS-CoV-2 entra nas células da mucosa respiratória através do receptor Enzima Conversora de Angiotensina 2 (ECA2), que é altamente expresso nas células epiteliais do pulmão, onde o vírus é capaz de provocar um grande processo inflamatório, caracterizando a síndrome respiratória aguda grave. Neste momento, buscamos utilizar nossa expertise nas áreas de genética e epigenética para contribuir de forma significativa no contexto da pandemia do SARS-CoV-2. Até janeiro de 2021, apenas seis artigos foram conduzidos em humanos para identificar possíveis microRNAs como biomarcadores de diagnóstico ou de gravidade da COVID-19 em amostras humanas e até o momento não existem trabalhos de validação destes ou de outros microRNAs (miRNAs) como biomarcadores da COVID-19. Assim, os objetivos deste projeto são: 1) Avaliar miRNAs como possíveis biomarcadores de diagnóstico da COVID-19 e 2) Identificar através de sequenciamento os principais miRNAs plasmáticos e polimorfismos no receptor ECA relacionados à gravidade induzidas pela COVID-19. Para atingir o objetivo 1, será realizado um estudo observacional, analítico, transversal, cuja amostragem é não probabilística do tipo consecutiva. Para identificar miRNAs que possam ser biomarcadores de diagnóstico da COVID-19 (estudo transversal), serão formados dois grupos, grupo Caso (50 pacientes): amostra de sujeitos do Hospital Estadual de Sumaré (HES) que tiveram seu exame para SARS-CoV-2 positivo no teste referência [Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real (RT-PCR)]; e grupo Controle (50 pacientes): amostra de voluntários que tiveram seu exame negativo para SARS-CoV-2 no teste referência (RT-PCR). Os miRNAs serão extraídos de plasma, utilizando kit comercial, de 6 amostras do grupo Caso e 6 amostras do grupo Controle para realização da montagem da biblioteca, sequenciamento e análise diferencial dos miRNAs expressos. Após análise, será realizada análise in sílico e serão estabelecidos os miRNAs mais promissores para validação. A validação dos miRNAs selecionados será realizada nas demais amostras. 2) Para atingir o objetivo 2, será realizado um estudo observacional, analítico, coorte retrospectivo, cuja amostragem é não probabilística do tipo consecutiva. Para identificar miRNAs e polimorfismos no gene da ECA2 que possam ser biomarcadores de gravidade da COVID-19 (coorte retrospectivo), as amostras do grupo Caso (200 pacientes) serão estratificadas pela gravidade da doença (doença leve-moderada e doença grave-crítica) através de parâmetros clínicos e tomografia computadorizada de pulmão. Os miRNAs serão extraídos de 6 amostras de plasma dos pacientes que apresentaram doença leve-moderada e de 6 amostras dos pacientes que apresentaram doença grave-crítica, para posterior montagem da biblioteca, sequenciamento e análise diferencial. Após análise, será realizada análise in sílico e serão estabelecidos os miRNAs mais promissores para validação. A validação dos miRNAs selecionados será realizada nas demais amostras. A análise de polimorfismos no gene da ECA2 será feita por RT-PCR. (AU)