Estudo do desenvolvimento floral e da cinética do crescimento radicular em plantas transgênicas com níveis alterados de expressão de NtRH35 (NtDDX35)

Resumo

Trabalhos anteriores do nosso grupo (FAPESP 16/20486-3) identificaram uma nova proteína, ainda não caracterizada em plantas, como parceira de interação de SCI1 (Stigma/style Cell-cycle Inhibitor 1) em Nicotiana tabacum. Essa proteína é semelhante a RNA helicases do tipo DEAD-box e foi denominada NtDDX35 ou NtRH35. Para estudar a função do gene codificador de NtRH35, que é expresso em todos os órgãos das plantas, foram produzidas plantas transgênicas com a superexpressão deste gene (NtRH35-OE), bem como seu silenciamento via RNAi (NtRH35-Ri) (Pinoti, 2021). Em análises preliminares, foram observados fenótipos contrastantes quanto ao crescimento e desenvolvimento vegetativo e floral das plantas transgênicas em relação a plantas controle (WT). As plantas com silenciamento de NtRH35 são mais baixas em relação ao genótipo selvagem (WT) e tem dificuldade em completar o desenvolvimento floral. As plantas de superexpressão apresentam altura, espessura do caule, bem como órgãos aparentemente maiores. Estes fenótipos contrastantes nos transgênicos de NtRH35 sugerem uma função no controle da divisão e/ou expansão celular. Para compreender quais mecanismos conduzem a esses fenótipos, nesse projeto temos como objetivos avaliar a cinética do ciclo celular e adquirir medidas absolutas de tamanho e volume celular, que serão feitas durante o crescimento radicular. Adicionalmente avaliaremos o desenvolvimento floral nas diferentes linhagens de plantas transgênicas com níveis alterados de expressão de NtRH35. Para alcançar estes objetivos, serão utilizadas modernas técnicas de bioimagem, como a marcação por "5-ethynyl-2 deoxyuridine" (EdU) combinada à microscopia multifóton ("two-photon microscopy"), em complementação a análises de microscopia de luz transmitida.