Decifrando SCI1, sua expressão durante o desenvolvimento floral e os mecanismos de ação para o controle da proliferação celular

Resumo

Este projeto pretende estudar a proteína SCI1 (Stigma/style Cell-cycle Inhibitor 1) de Nicotiana tabacum e os mecanismos pelos quais ela regula o desenvolvimento e influencia o tamanho final do órgão reprodutor feminino das plantas (pistilo). Notadamente, este projeto pretende avançar na compreensão de como SCI1 regula a proliferação celular. Os objetivos desse projeto são: 1) Investigar a hipótese da proteína SCI1 receber modificações pós-traducionais. Esta investigação será feita principalmente por espectrometria de massa da proteína extraída de estigmas/estiletes. 2) Confirmar e ampliar o conhecimento sobre o interactoma de SCI1 e NtCDKG;2. A análise dos clones resultantes do screening de duplo-híbrido em leveduras (Y2H), usando NtCDKG;2 como isca, será continuada. Adicionalmente, alguns parceiros identificados de interação com SCI1 serão testados com NtCDKG;2 e vice-e-versa, por Y2H e Bimolecular Fluorescence Complementation (BiFC). 3) Investigar a hipótese de SCI1 ter um papel em processos relacionados ao splicing de RNAs. Serão testadas as interações de SCI1 com a proteína NtU2a´(spliceossoma) e NtRS2Z33 (fator de splicing), além de alguns candidatos do objetivo 2. 4) Investigar a hipótese de SCI1 ter um papel em processos relacionados à transcrição de RNAs. Serão analisados os resultados do RNASeq de estigmas/estiletes de plantas selvagens e de RNAi de SCI1; identificados os genes diferencialmente expressos e realizados experimentos de RT-qPCR para confirmar os resultados. 5) Investigar a hipótese de SCI1 ser expresso no meristema floral e ter um papel no controle da proliferação celular neste meristema. Será feita a hibridização in situ de SCI1 em meristemas, a produção e análise de plantas transgênicas SCI1prom::SCI1-GFP e será iniciada a produção de plantas nocautes para SCI1, por CRISPR/Cas 9. (AU)