Estudo de fatores que interferem no desenvolvimento e o tamanho final do órgão reprodutor feminino das plantas

Resumo

Este projeto pretende estudar os mecanismos moleculares pelos quais o hormônio auxina e as proteínas SCI1 (Stigma/style Cell-cycle Inhibitor 1) e TOB092H06 influenciam a divisão e a expansão celular, regulando o desenvolvimento e o tamanho final do órgão reprodutor feminino (pistilo). Dessa forma, os objetivos desse projeto são: 1) Estudar os efeitos de níveis diminuídos de auxina no desenvolvimento do pistilo: a. Produzir plantas transgênicas de N. tabacum com níveis diminuídos de auxina no pistilo, por meto da expressão do gene iaaL de Agrobacterium tumefaciens, sob o controle do promotor específico de estigma STIG1; b. Analisar os fenótipos das plantas transgênicas, comparando-as com as selvagens (SR1), principalmente com relação à morfologia do pistilo e aos parâmetros reprodutivos; c. Realizar a separação, por eletroforese bidimensional, de extratos protéicos dos pistilos de plantas transgênicas STIG1 ::iaaL e selvagens SR1, e analisar as proteínas diferencialmente expressas, que serão identificadas por MALDI-TOF. 2) Caracterizar a proteína SCI1. a. Expressar a proteína SCI1 recombinante em E. coli; b. Produzir anticorpo contra a proteína SCI1 recombinante; c. Comparar os resíduos fosforilados de SCI1 extraída de folhas e pistilos de plantas transgênicas 35Sprom::SCI1-GFP. 3) Estudar interações entre SCI1 e proteínas que interferem com a divisão celular, a. Testar a interação por duplo híbrido das proteínas cyclin L e cyclin-related com a quinase dependente de ciclina G (CDKG;2); b. Caso as proteínas acima citadas interajam, testar a atividade de CDKG;2 sobre histonas e/ou outro possível substrato de CDK; c. Se a e b forem positivos, testar a inibição da atividade da CDK G por SCI1. 4) Estudar a proteína codificada pelo clone TOB092H06 e seu papel no desenvolvimento do pistilo. a. Expressar a proteína recombinante 092H06 em sistema heterólogo, como E. coli; b. Produzir anticorpo contra a proteína 092H06 recombinante; c. Quantificar a proteína 092H06 nas plantas transgênicas e controle. (AU)