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Descoberta de anticorpos monoclonais humanos neutralizantes de serinoproteases a partir da técnica de Phage Display para a produção de soro antibotrópico

Processo: 24/01801-1
Modalidade de apoio:Bolsas no Brasil - Mestrado
Data de Início da vigência: 01 de outubro de 2024
Data de Término da vigência: 28 de fevereiro de 2026
Área de conhecimento:Ciências Biológicas - Imunologia
Pesquisador responsável:Manuela Berto Pucca
Beneficiário:Marcela Romanazzi Fernandes
Instituição Sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas (FCFAR). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Araraquara. Araraquara , SP, Brasil
Assunto(s):Anticorpos monoclonais   Phage display   Biotecnologia
Palavra(s)-Chave do Pesquisador:anticorpo monoclonal | Antiveneno | biopanning | Human monoclonal antibodies | phage display | serinoprotease | Biotecnologia

Resumo

A condição de ofidismo é reconhecida como uma doença negligenciada, exercendo um impacto significativo na saúde pública. Apesar da existência de um tratamento específico, o antiveneno, este apresenta diversas desvantagens, incluindo efeitos colaterais adversos e custos elevados. Nesse contexto, este estudo propõe a descoberta de anticorpos monoclonais (scFv) com reatividade cruzada, direcionados a serinoproteases de serpentes botrópicas. O processo de desenvolvimento compreende primeiramente a realização de ensaios para avaliar a atividade fibronolítica e coagulante em soluções de fibrinogênio e plasma humano das serinoproteases. A seleção de anticorpos com alta afinidade e reconhecimento cruzado será conduzida por meio do método de cross-panning. Posteriormente, os fago-anticorpos selecionados serão amplificados, e os fagomídeos serão recuperados.A análise dos fago-anticorpos escolhidos será realizada por meio de ELISA policlonal, seguida pela produção desses anticorpos utilizando ELISA monoclonal. Os clones positivos serão sequenciados, e os fragmentos de anticorpos monoclonais humanos serão produzidos e purificados através do método ELISA.Além disso, ensaios de neutralização in vitro serão conduzidos para avaliar a atividade fibrinolítica e coagulante, enquanto ensaios in vivo abordarão a atividade hemorrágica, nociceptiva e o edema de pata resultantes da presença das serinoproteases. Este estudo visa contribuir significativamente para o desenvolvimento de terapias eficazes contra o envenenamento por serpentes, destacando-se pela abordagem abrangente que abarca desde a produção até a caracterização funcional detalhada dos anticorpos monoclonais obtidos.

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Publicações científicas
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
NATTRODT, JANIO J. M.; BEZERRA-DE-FREITAS, VICTORIA A.; MERVAL, ANA PAULA S. S.; FILARDI, ELOISE T.; CERNI, FELIPE A.; DANTAS, DOMINGOS S. M.; LINS, ALYSSON B. M.; GALAN, LUIS E. B.; CARBONELL, ROBERTO C.; PUCCA, MANUELA B.. Case report: Clinical management of freshwater stingray wounds using negative pressure therapy. FRONTIERS IN MEDICINE, v. 12, p. 7-pg., . (24/13258-0, 24/01801-1)
ROMANAZZI, MARCELA; FILARDI, ELOISE T. M.; PIRES, GEOVANNA M. M.; CERVEJA, MARCOS F.; MELO-DOS-SANTOS, GUILHERME; OLIVEIRA, ISADORA S.; FERREIRA, ISABELA G.; CERNI, FELIPE A.; SANTOS-FILHO, NORIVAL ALVES; MONTEIRO, WUELTON M.; et al. The Versatility of Serine Proteases from Brazilian Bothrops Venom: Their Roles in Snakebites and Drug Discovery. BIOMOLECULES, v. 15, n. 2, p. 25-pg., . (23/15381-1, 23/11264-0, 24/08990-4, 24/01801-1, 24/13258-0, 20/13176-3)