Descoberta de anticorpos monoclonais humanos neutralizantes de serinoproteases a partir da técnica de Phage Display para a produção de soro antibotrópico

Resumo

A condição de ofidismo é reconhecida como uma doença negligenciada, exercendo um impacto significativo na saúde pública. Apesar da existência de um tratamento específico, o antiveneno, este apresenta diversas desvantagens, incluindo efeitos colaterais adversos e custos elevados. Nesse contexto, este estudo propõe a descoberta de anticorpos monoclonais (scFv) com reatividade cruzada, direcionados a serinoproteases de serpentes botrópicas. O processo de desenvolvimento compreende primeiramente a realização de ensaios para avaliar a atividade fibronolítica e coagulante em soluções de fibrinogênio e plasma humano das serinoproteases. A seleção de anticorpos com alta afinidade e reconhecimento cruzado será conduzida por meio do método de cross-panning. Posteriormente, os fago-anticorpos selecionados serão amplificados, e os fagomídeos serão recuperados.A análise dos fago-anticorpos escolhidos será realizada por meio de ELISA policlonal, seguida pela produção desses anticorpos utilizando ELISA monoclonal. Os clones positivos serão sequenciados, e os fragmentos de anticorpos monoclonais humanos serão produzidos e purificados através do método ELISA.Além disso, ensaios de neutralização in vitro serão conduzidos para avaliar a atividade fibrinolítica e coagulante, enquanto ensaios in vivo abordarão a atividade hemorrágica, nociceptiva e o edema de pata resultantes da presença das serinoproteases. Este estudo visa contribuir significativamente para o desenvolvimento de terapias eficazes contra o envenenamento por serpentes, destacando-se pela abordagem abrangente que abarca desde a produção até a caracterização funcional detalhada dos anticorpos monoclonais obtidos. (AU)