Pluripotência induzida in vitro a partir de células derivadas de urina em suínos

• Processo: 22/12193-7
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Publicações científicas - Artigo
• Data de Início da vigência: 01 de novembro de 2022
• Data de Término da vigência: 30 de abril de 2023
• Área do conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
• Pesquisador responsável: Fabiana Fernandes Bressan
• Beneficiário: Fabiana Fernandes Bressan
• Instituição Sede: Faculdade de Zootecnia e Engenharia de Alimentos (FZEA). Universidade de São Paulo (USP). Pirassununga , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 15/26818-5 - Investigação de mecanismos celulares e moleculares da aquisição da toti- e pluripotência induzida in vitro - modelo translacional, AP.JP
• Assunto(s): Biotecnologia da reprodução Pesquisa médica translacional Células-tronco
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Biotecnologia da reprodução | Medicina Translacional | Células tronco

Resumo

INTRODUÇÃOA geração de células-tronco pluripotentes induzidas (iPSC) tem sido um divisor de águas na medicina translacional e regenerativa; entretanto, sua aplicabilidade em larga escala ainda é dificultada pela escassez de protocolos acessíveis, seguros e reprodutíveis. O modelo suíno é um grande modelo biomédico que permite aplicações translacionais, incluindo edição de genes, análise de longo prazo in vivo e descendentes; portanto, adequado tanto para a medicina como para a produção animal.OBJETIVOSAqui células derivadas de urina (UDCs) foram isoladas de urina porcina e reprogramadas in vitro à pluripotência.MÉTODOSAs UDCs foram reprogramadas in vitro usando vetores humanos ou murinos OCT4, SOX2, KLF4 e C-MYC e cultivadas com suplementação de bFGF. Para caracterizar as células-tronco pluripotentes induzidas em suínos, três linhagens clonais foram submetidas à imunocitoquímica para detecção de fosfatase alcalina (AP), OCT4, SOX2, NANOG, TRA1 81 e SSEA 1. Transcritos endógenos relacionados à pluripotência (OCT4, SOX2 e NANOG) foram analisados via RT-qPCR em diferentes momentos durante a cultura, e todas as três linhagens formaram corpos embrióides (EBs) quando cultivadas em suspensão sem suplementação de bFGF.RESULTADOSAs UDCs foram isoladas de amostras de urina suína e quando na passagem 2 submetidas à reprogramação in vitro. Colônias de iPSCs foram obtidas apenas de UDCs transduzidas com fatores murinos (mOSKM), mas não de fatores humanos (hOSKM). Três linhagens clonais foram isoladas e posteriormente cultivadas por pelo menos 28 passagens, todas as linhagens foram positivas para detecção de AP, os marcadores OCT4, SOX2, NANOG, embora a análise imunocitoquímica também tenha revelado perfis fenotípicos heterogêneos entre linhagens e passagens para NANOG e SSEA 1, resultados semelhantes foram observados na abundância dos transcritos endógenos relacionados ao estado pluripotente. Todas as linhagens clonais quando cultivadas em suspensão sem bFGF foram capazes de formar EBs expressando transcrições de camadas de ectoderma e mesoderme.CONCLUSÃOPela primeira vez, UDCs foram isoladas no modelo suíno e reprogramados em um estado semelhante ao pluripotente, permitindo novas inúmeras aplicações em medicina regenerativa humana ou veterinária. (AU)