Papel da miosina IXB na regulação da ativação do inflamassoma

• Processo: 22/12443-3
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de fevereiro de 2023
• Data de Término da vigência: 31 de janeiro de 2026
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Imunologia - Imunologia Celular
• Pesquisador responsável: Bruna Cunha Gondim de Alencar
• Beneficiário: Bruna Cunha Gondim de Alencar
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Pesquisadores associados: Alessandra Pontillo ; Denise Morais da Fonseca
• Assunto(s): Imunidade inata Citoesqueleto Inflamassomos Proteína 3 que contém domínio de pirina da família NLR Pirina Yersinia pseudotuberculosis
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Citoesqueleto | inflamassoma | M | Miosina IXB | Nlrp3 | Pirina | pseudotuberculosis | Imunidade inata

Resumo

Miosinas são proteínas motoras dependentes de actina. As células do sistema imunológico expressam uma gama de miosinas com diversas funções em processos como endo e exocitose, migração e divisão celular. A participação das miosinas na regulação da ativação e sinalização de receptores citoplasmáticos da imunidade inata, porém, é desconhecida. A miosina não-convencional IXB apresenta alta expressão em leucócitos e, além de ser um motor capaz de se deslocar sobre filamentos de actina, também possui um domínio RhoGAP que inibe a ativação de pequenas GTPases da família Rho, em especial RhoA, que modulam a polimerização da actina. Polimorfismos no gene MYO9B já foram associados à maior susceptibilidade a doenças inflamatórias, em especial à doença inflamatória intestinal.Doenças inflamatórias também estão relacionadas aos sensores da imunidade inata denominados inflamassomas. Os inflamassomas são complexos multiprotéicos formados em resposta à ativação de receptores de reconhecimento de padrão, que levam à produção e liberação das citocinas inflamatórias IL-1b e IL-18, além da morte celular inflamatória conhecida como piroptose. Variantes genéticas tanto do gene NLRP3 quanto do gene MEFV (que codifica o sensor pirina) já foram correlacionadas com o desenvolvimento de uma série de doenças inflamatórias infecciosas ou não, incluindo a doença inflamatória intestinal. O sensor pirina percebe a inibição da atividade da proteína RhoA, enquanto o sensor NLRP3 percebe outras mudanças patogênicas na célula decorrentes da presença de microorganismos ou de dano celular, e sua ativação parece ser regulada tanto por microtúbulos quanto pela rede de actina.Assim, uma vez que a Myo9b participa da regulação do citoesqueleto de actina, que o citoesqueleto de actina modula a ativação dos inflamassomas de NLRP3 e de pirina, e que há evidências do envolvimento das três proteínas na gênese das mesmas doenças inflamatórias, este projeto visa investigar a modulação da ativação dos inflamassomas de NLRP3 e de pirina pela miosina IXB. Para tal, a Myo9b será silenciada ou nocauteada em células monocíticas Thp-1 ou derivadas de monócitos sanguíneos humanos, que serão então estimuladas com ativadores de NLRP3 e de pirina, e serão analisadas a produção de IL-1b, a formação de complexos protéicos contendo a proteína ASC, além da indução de morte celular. As células silenciadas para Myo9b também serão infectadas com bactérias Yersinia pseudotuberculosis, que apresentam toxinas ativadoras do inflamassoma de pirina. Investigaremos então a resposta da células monocíticas às bactérias usando os parâmetros já citados. Este projeto pretende, portanto, melhor entender a regulação dos inflamassomas por parte do citoesqueleto, interação essa que foi pouco explorada até o momento, principalmente no que diz respeito às miosinas. Não há qualquer estudo a respeito da participação das miosinas, em especial as não-convencionais, na regulação dos inflamassomas ou da resposta imune intrínseca, de modo que o projeto tem o potencial de elucidar um nível de regulação ainda inexplorado. Finalmente, essas informações permitirão a concepção de novos tratamentos para doenças inflamatórias envolvendo os inflamassomas. (AU)