Estrutura e função de ATPases

• Processo: 94/03696-3
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de dezembro de 1994
• Data de Término da vigência: 29 de fevereiro de 1996
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Morfologia
• Pesquisador responsável: Sergio Verjovski Almeida
• Beneficiário: Sergio Verjovski Almeida
• Instituição Sede: Instituto de Química (IQ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Schistosoma mansoni
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Anticorpo Antiapirase | Calcio Atpses | Ecto Atpse | Expressao Em Levedura | Schistosoma Mansoni

Resumo

Estamos utilizando a engenharia genética como uma ferramenta importante para o estudo da estrutura da Cálcio-ATPase de músculo e sua relação com a função. Através das técnicas de DNA recombinante, obtivemos a expressão em levedura do cDNA que codifica a Cálcio-ATPase nativa da membrana do retículo sarcoplasmático de coelho, e o próximo passo é a otimização da expressão. O objetivo é obter quantidades de proteína nativa ou recombinante suficientes para permitir o estudo direto do efeito de mutações pontuais sobre os sítios de cálcio desta proteína, o que atualmente não se consegue com a expressão em células COS-1, utilizadas por outros grupos. O objetivo final é entender o mecanismo molecular de conversão de energia nos seres vivos, que poderá ser útil, no futuro, para se obter processos in-vitro que utilizem a energia de forma tão eficiente quanto os mecanismos biológicos de conversão de energia. Outra proteína de membrana de grande interesse para nosso grupo é a Ecto-ATPase da face externa da membrana do tegumento do Schistosoma mansoni. Esta é uma nova enzima que identificamos recentemente, e que pode ter um papel importante na sobrevida deste parasita na circulação do homem, escapando dos mecanismos de defesa de plaquetas e linfócitos T-citolíticos do homem que envolva ADP e ATP como mediadores (Vasconcelos et al., 1993). Atualmente visamos clonar o gene que codifica esta Ecto-ATPase e, no futuro, fazer a expressão heteróloga em levedura desta enzima, uma ATP-difosfohidrolase cuja obtenção atualmente é limitada pela quantidade de vermes que recolhemos da veia porta de camundongos infectados. Apenas uma Ecto-ATPase foi clonada, em 1989 (Lin and Guidotti, 1989). A clonagem da enzima de S. mansoni, como propõe aqui, irá permitir identificar os domínios funcionais que sejam similares a esta única Ecto-ATPase clonada, e verificar quais as diferenças estruturais que existem em relação às ATPases de transporte de íons, que possuem dependência para cálcio e magnésio e especificidade para ATP bastante diferentes das especificidades das Ecto-ATPases (ver Vasconcelos et al., 1993). (AU)