O papel do fator de transcricao irf-1 (interferon regulatory factor) na sinalizacao nuclear desencadeada pelo tnf (tumor necrosis factor).

• Processo: 97/09210-3
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de outubro de 1997
• Data de Término da vigência: 31 de março de 1999
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Luiz Fernando Lima Reis
• Beneficiário: Luiz Fernando Lima Reis
• Instituição Sede: Instituto Ludwig de Pesquisa sobre o Câncer (ILPC). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Citocinas Fatores de necrose tumoral
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Citocinas | Delecao Genica | Ifn | Sinalizacao Nuclear | Tnf | Trf-1

Resumo

O fator de necrose tumoral (TNF) desempenha um papel fundamental na regulação do sistema imune, estando envolvido nos processos infecciosos, na morte celular programada, eliminação de células tumorais, e em processos patológicos de auto-agressão. Para exercer suas atividades biológicas, o TNF induz a expressão de uma série de genes que, por sua vez, são responsáveis pelos efeitos biológicos de TNF. Dentre os genes induzidos por TNF, alguns são também induzidos por Interferons (IFN), o que explicaria, pelo menos em parte, as atividades biológicas comuns a estas duas citosinas como por exemplo, atividade anti-vírica, aumento da expressão de antígenos de histocompatibilidade, atividades citostáticas,etc. O objetivo maior de nosso grupo é contribuir para o entendimento dos mecanismos moleculares que regulam as atividades biológicas do TNF e outras citosinas pró-inflamatórias, como os IFNs, através do estudo dos processos de sinalização nuclear desencadeados por estas citosinas. Estes mecanismos são responsáveis pela ativação da expressão de genes em resposta a estes estímulos e, uma vez elucidados, constituem alvo para o desenho de novas drogas que poderão modular atividades biológicas mais ou menos desejadas em condições patológicas especificas. Em estudos anteriores, demonstramos que o fator de transcrição IRF-1 ( Interferon Regulatory Factor-1 ) é induzido tanto por IFN quanto por TNF e é um candidato como fator de transcrição responsável pela indução de um grupo comum de genes por IFN ou TNF ( Fujita et al, 1989, Reis et al, 1990, Reis et al, 1992). Este projeto tem por objetivo específico determinar o papel do IRF-1 na transdução de sinal desencadeada por TNF. Como abordagem metodológica, iremos utilizar células de fibroblasto de camundongos do tipo selvagem ou deficientes ( animais "Knock-Outs"), para o gene IRF-1, obtidos por recombinação homologa em células embrionárias. Estas células foram imortalizadas espontaneamente por repiques sucessivos e serão utilizadas em dois grupos de experimentos. Na primeira abordagem, vamos estudar a indução por TNF de alguns genes que são sabidamente induzidos por IFNs e que possuem sítio de ligação para IRF-1 em sua região promotora. Diferenças no padrão de indução entre células selvagens ou mutantes poderiam indicar um papel importante de IRF-1 na sinalização pelo TNF. Na segunda abordagem, realizaremos um estudo comparativo entre as populações de mRNA induzidos por TNF nas duas populações celulares, utilizando a técnica de "Diferencial Display RT-PCR". Com esta abordagem, pretendemos identificar novos genes cuja indução da expressão por TNF seja dependente de IRF-1. Os dados obtidos poderão contribuir para a elucidação dos mecanismos de sinalização utilizados por TNF e, como conseqüência, criar novos alvos para drogas que possam modulara atividade biológica desta citosina. (AU)