Desenvolvimento de ensaio quantitativo em tempo real para deteccao da producao de toxina botulitica tipo a em alimentos.

• Processo: 01/09659-8
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 2002
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2007
• Área do conhecimento: Ciências Agrárias - Ciência e Tecnologia de Alimentos - Ciência de Alimentos
• Pesquisador responsável: Ruben Pablo Schocken-Iturrino
• Beneficiário: Ruben Pablo Schocken-Iturrino
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias (FCAV). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Jaboticabal. Jaboticabal , SP, Brasil
• Assunto(s): Neurotoxinas Clostridium botulinum
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Clostridium Botulinum | Neurotoxinas

Resumo

O presente estudo será desenvolvido para padronizar ensaio quantitativo em tempo real para detecção da produção de toxina botulínica tipo A em alimentos a partir da utilização de sondas marcadas com corantes fluorescentes. Nesse intuito, serão desenhados primers e sondas específicas para o gene codificador da neurotoxina. A diluições seriadas de cepa referência de Clostridium botulinum tipo A serão inoculadas em amostras de alimentos para determinação do limiar de detecção da técnica. Cepas referência de C. botulinum tipos B-G, C.butyricum, C.baratii e C.argentinense também serão utilizadas para verificação da especificidade dos primers e sondas sintetizados. As amostras contaminadas experimentalmente serão submetidas a extração de RNA mensageiro, assim como inoculadas em camundongos para o teste de toxicidade aguda (bioensaio). Como controle positivo do PCR em tempo real será utilizado plasmídeo a ser construído com promotor T7 e seqüência do gene alvo. A sensibilidade, a especificidade e a concordância entre o protocolo desenvolvido e o bioensaio serão determinados de acordo com os resultados obtidos. (AU)