Genomica funcional e caulobacter crescentus: busca de genes envolvidos em reparo de dna.

• Processo: 02/11788-3
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2003
• Data de Término da vigência: 30 de junho de 2005
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
• Pesquisador responsável: Carlos Frederico Martins Menck
• Beneficiário: Carlos Frederico Martins Menck
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Reparo do DNA Diferenciação Evolução
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Diferenciacao | Dna Lesado | Evolucao | Mutadores | Reparo De Dna

Resumo

Este projeto visa identificar genes envolvidos em reparo de DNA na proteobactéria, subdivisão alfa, Caulobacter crescentus através de uma abordagem genômica funcional. Para isso deveremos selecionar mutantes dessa bactéria que tenham fenótipos mutadores ou sensibilidade a agentes genotóxicos (metil-metano-sulfonato e UV). Esses mutantes serão obtidos a partir de uma biblioteca de aproximadamente 5000 clones, mutada por inserção aleatória do transposon Tn5, e a abordagem será realizada por testes em larga escala (96 clones testados a cada vez), antes de uma confirmação individual. O inserto Tn5 permitirá determinar por PCR e seqüenciamento de DNA identificar as regiões flanqueadoras do transposon e, portanto, a identidade do gene mutado. Esta é, de nosso conhecimento, a primeira abordagem genômica para identificação de genes de reparo de DNA em bactérias, e a nossa expectativa é de que consigamos demonstrar a função de vários ortólogos já identificados em E.coli. além de identificar genes cuia função em reparo de DNA ainda não foi descrita. (AU)