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A relação entre o fator sigmaS da RNA polimerase e o regulon PHO de Escherichia coli

Resumo

A bactéria Escherichia coli possui 7 fatores sigma distintos. O fator sigma principal- sigma D, é responsável pela transcrição da maior parte dos genes da bactéria, enquanto que sigma S, o segundo em importância, é responsável pela transcrição de genes envolvidos na resposta ao estresse e na fase estacionária de crescimento. Em nosso laboratório foi demonstrado que sigma S inibe indiretamente a transcrição dos genes pertencentes ao regulon PHO através de um processo de competição com sigma D pelo cerne da RNA polimerase. Somente a transcrição do operon pst não é inibida por sigma S e o que diferencia pst dos demais genes de PHO é a presença de um resíduo de citosina na posição -13 de seu promotor. Neste projeto estaremos avaliando se a simples presença de uma citosina na posição -13 é suficiente para conferir a um promotor a possibilidade de ser reconhecido por sigma S. Estaremos também testando o envolvimento de uma outra característica do promotor de pst, que é a presença de um sítio de ligação de IHF. Serão construídos os mutantes para avaliar a relevância de IHF para a transcrição de pst via sigma S. A competição entre os fatores sigma S e sigma D será avaliada in vitro. As proteínas necessárias serão purificadas e testes de transcrição in vitro e gel shift serão realizados. Neste projeto também avaliaremos o polimorfismo de rpoS (o gene que codifica à sigma S) em diversas cepas K-12 de E. coli e relacionaremos o tipo de alelo de rpoS com a atividade de fosfatase alcalina (codificada por phoA, pertencente ao regulon PHO) e as atividades de catalase e OsmY, ambos codificados por genes transcritos exclusivamente por sigma S. A atividade mutadora destas cepas também será avaliada. (AU)