Estudo de aspectos estruturais da cromatina durante a ocorrencia de pufes em rhynchosciara americana.

• Processo: 05/50015-8
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 2005
• Data de Término da vigência: 30 de junho de 2007
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Glaucia Maria Machado Santelli
• Beneficiário: Glaucia Maria Machado Santelli
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Inativação gênica Rhynchosciara Cromatina
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Cromatina | Desenvolvimento De Insetos | Endociclos | Pufes Amplificados | Rhynchosciara | Silenciamento Genico

Resumo

Este projeto visa estudar a organização funcional da cromatina em regiões de amplificação gênica (pufes de DNA) de cromossomos politênicos de Rhynchosciara americana, pela análise da possível participação de determinadas proteínas nos processos de amplificação e de transcrição destes pufes. As proteínas candidatas foram selecionadas em um banco de cDNA seqüenciado recentemente em nosso laboratório. Este banco foi construído a partir de um tecido larval (glândula salivar) no momento em que se inicia o último ciclo de politenia, fase em que ocorre também o fenômeno de amplificação gênica. Simultaneamente propõe-se a implantação no laboratório de técnicas de silenciamento gênico (RNAi e/ou oligos antisense morfolínicos), necessárias ao avanço das pesquisas em nosso sistema modelo, visto que até hoje não se estabeleceu linhagem estável em laboratório deste díptero, o que impede análises genéticas convencionais. Quatro destes mensageiros foram pré-selecionados para as análises iniciais do envolvimento na organização da estrutura dos cromossomos politênicos dentre estes genes estão Histona H3.3 e HMG-D. A análise das alterações fenotípicas em condições de silenciamento gênico será realizada por reconstruções 3D de secções óticas obtidas ao microscópio confocal de varredura a laser. Pela primeira vez estudos são propostos sobre aspectos estruturais dos pufes amplificados em Rhynchosciara, visto que agora existe uma coleção de genes interessantes do próprio sistema servindo de ponto de partida e condições técnicas instaladas disponíveis. (AU)