Efeitos de drogas imunossupressoras sobre a regeneração hepática em animais recém-desmamados: avaliação imunohistoquímica com utilização da técnica do tissue microarray

• Processo: 07/01333-2
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de junho de 2007
• Data de Término da vigência: 31 de maio de 2009
• Área do conhecimento: Ciências da Saúde - Medicina
• Pesquisador responsável: Uenis Tannuri
• Beneficiário: Uenis Tannuri
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina (FM). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Cirurgia pediátrica Transplante de fígado Regeneração hepática Imuno-histoquímica Imunossupressores Corticosteroides Proliferação celular Apoptose
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: cyclosporine | immunosuppressive treatment | liver transplantation | steroids | tacrolimus | Cirurgia Pediátrica

Resumo

A regeneração hepática é fenômeno que ocorre como resposta fisiológica após perdas de massa do parênquima e nos pacientes submetidos a transplantes de segmentos ou lobos hepáticos. Depende da capacidade de proliferação dos hepatócitos e das células hepáticas-tronco, dos mecanismos iniciadores (fatores de crescimento celular e citocinas) e da apoptose (morte celular programada) de hepatócitos. Entre os modelos experimentais para estudos da regeneração hepática, não existe descrição de modelo em animais recém-nascidos ou em fase de desmame. Também, os mecanismos moleculares da proliferação celular e da apoptose durante o processo de regeneração foram pouco estudados, bem como os efeitos de drogas imunossupressoras, habitualmente utilizadas no período pós-operatório do transplante hepático. O presente trabalho constitui sequência de linha de pesquisa desenvolvida há 2 anos no Laboratório de Cirurgia Pediátrica da Faculdade de Medicina da USP (LIM-30). Objetivo: estudar os efeitos das drogas imunossupressoras corticosteróide, Ciclosporina A e Tacrolimus (FK506) sobre a regeneração hepática, utilizando métodos imunohistoquímicos e a técnica do tissue microarray;. Material e métodos: serão utilizados fígados conservados em blocos de parafina, obtidos a partir da pesquisa anterior. Os fígados remanescentes foram colhidos 24 horas após hepatectomia parcial em ratos recém-desmamados divididos em grupos, de acordo com o procedimento a que foram submetidos. Cada grupo foi constituído de 6 animais: 1. controle; 2. cirurgia simulada (apenas abertura e fechamento da cavidade abdominal); 3. hepatectomia; 4. hepatectomia + corticosteróide (solumedrol 100mg/kg de peso por via intraperitoneal); 5. hepatectomia + Ciclosporina A (10 mg/kg de peso corpóreo por via intragástrica); 6. hepatectomia + Tacrolimus (1mg/kg de peso por via intragástrica). Os tecidos serão estudados utilizando-se a técnica do tissue microarray. A partir de cada bloco de parafina da experiência anterior, será extraído um bloco correspondente, com a utilização de agulha apropriada, dando origem a um pequeno cilindro com dimensões de 1,0 X 1,0 X 4 mm que será distribuído em posição orientada no bloco receptor de parafina. Como resultado, será obtido bloco único de parafina contendo dezenas de pequenos cilindros, correspondentes a amostras representativas de todos os grupos de animais. Serão feitos cortes de 3 µm de espessura a partir dos blocos de parafina. Os cortes serão a seguir processados para imunohistoquímica. Serão estudados o antígeno nuclear de proliferação celular (PCNA) e o método de TUNEL (Terminal deoxinucleotidyl transferase mediated digoxigenin uracil triphospahate nick end labeling) para quantificação da apoptose. Serão feitas contagens dos núcleos celulares corados e os resultados numéricos submetidos a cálculos estatísticos utilizando-se, se possível, método de ANOVA. Se a distribuição dos dados for do tipo não-paramétrica, será utilizado o teste de Kruskall Wallys. (AU)

Publicações científicas

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(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

SANTOS‚ M.M.; TANNURI‚ U.; COELHO‚ M.C.M.. Study of acetylcholinesterase activity in rectal suction biopsy for diagnosis of intestinal dysganglionoses: 17-year experience of a single center. PEDIATRIC SURGERY INTERNATIONAL, v. 24, n. 6, p. 715-719, 2008. (07/01333-2)

TANNURI‚ A.C.A.; TANNURI‚ U.; WAKAMATSU‚ A.; MELLO‚ E.S.; COELHO‚ M.C.M.; DOS SANTOS‚ N.A.S.R.. Effect of the immunosuppressants on hepatocyte proliferation and apoptosis in a young animal model of liver regeneration: An immunohistochemical study using tissue microarrays. PEDIATRIC TRANSPLANTATION, v. 12, n. 1, p. 40-46, 2008. (07/01333-2)

ANA CRISTINA AOUN TANNURI; UENIS TANNURI; MARIA CECÍLIA COELHO; NEIDE APARECIDA DOS SANTOS; EVANDRO SOBROZA DE MELLO. Modelos experimentais de hepatectomia e regeneração hepática em ratos recém-nascidos e recém-desmamados. Clinics, v. 62, n. 6, p. 757-762, 2007-00-00. (07/01333-2)

COELHO, MARIA CECILIA M.; TANNURI, UENIS; BENDITT, ISRAEL; SANTOS, MARIA MERCES. Studies of RET gene expression and acetylcholinesterase activity in a series of sporadic Hirschsprung's disease. PEDIATRIC SURGERY INTERNATIONAL, v. 24, n. 9, p. 1017-1021, SEP 2008. (07/01333-2)

MENDES GIBELLI, NELSON ELIAS; TANNURI, UENIS; DE MELLO, EVANDRO SOBROZA; RODRIGUES, CONSUELO JUNQUEIRA. Bile duct ligation in neonatal rats: Is it a valid experimental model for biliary atresia studies?. PEDIATRIC TRANSPLANTATION, v. 13, n. 1, p. 81-87, FEB 2009. (07/01333-2)