Efeitos de drogas imunossupressoras sobre a regeneração hepática em animais recém-desmamados: avaliação imunohistoquímica com utilização da técnica do tissue microarray

Resumo

A regeneração hepática é fenômeno que ocorre como resposta fisiológica após perdas de massa do parênquima e nos pacientes submetidos a transplantes de segmentos ou lobos hepáticos. Depende da capacidade de proliferação dos hepatócitos e das células hepáticas-tronco, dos mecanismos iniciadores (fatores de crescimento celular e citocinas) e da apoptose (morte celular programada) de hepatócitos. Entre os modelos experimentais para estudos da regeneração hepática, não existe descrição de modelo em animais recém-nascidos ou em fase de desmame. Também, os mecanismos moleculares da proliferação celular e da apoptose durante o processo de regeneração foram pouco estudados, bem como os efeitos de drogas imunossupressoras, habitualmente utilizadas no período pós-operatório do transplante hepático. O presente trabalho constitui sequência de linha de pesquisa desenvolvida há 2 anos no Laboratório de Cirurgia Pediátrica da Faculdade de Medicina da USP (LIM-30). Objetivo: estudar os efeitos das drogas imunossupressoras corticosteróide, Ciclosporina A e Tacrolimus (FK506) sobre a regeneração hepática, utilizando métodos imunohistoquímicos e a técnica do tissue microarray;. Material e métodos: serão utilizados fígados conservados em blocos de parafina, obtidos a partir da pesquisa anterior. Os fígados remanescentes foram colhidos 24 horas após hepatectomia parcial em ratos recém-desmamados divididos em grupos, de acordo com o procedimento a que foram submetidos. Cada grupo foi constituído de 6 animais: 1. controle; 2. cirurgia simulada (apenas abertura e fechamento da cavidade abdominal); 3. hepatectomia; 4. hepatectomia + corticosteróide (solumedrol 100mg/kg de peso por via intraperitoneal); 5. hepatectomia + Ciclosporina A (10 mg/kg de peso corpóreo por via intragástrica); 6. hepatectomia + Tacrolimus (1mg/kg de peso por via intragástrica). Os tecidos serão estudados utilizando-se a técnica do tissue microarray. A partir de cada bloco de parafina da experiência anterior, será extraído um bloco correspondente, com a utilização de agulha apropriada, dando origem a um pequeno cilindro com dimensões de 1,0 X 1,0 X 4 mm que será distribuído em posição orientada no bloco receptor de parafina. Como resultado, será obtido bloco único de parafina contendo dezenas de pequenos cilindros, correspondentes a amostras representativas de todos os grupos de animais. Serão feitos cortes de 3 µm de espessura a partir dos blocos de parafina. Os cortes serão a seguir processados para imunohistoquímica. Serão estudados o antígeno nuclear de proliferação celular (PCNA) e o método de TUNEL (Terminal deoxinucleotidyl transferase mediated digoxigenin uracil triphospahate nick end labeling) para quantificação da apoptose. Serão feitas contagens dos núcleos celulares corados e os resultados numéricos submetidos a cálculos estatísticos utilizando-se, se possível, método de ANOVA. Se a distribuição dos dados for do tipo não-paramétrica, será utilizado o teste de Kruskall Wallys. (AU)