Efeitos de acidos graxos sobre a producao e sinalizacao de tnf-alfa em macrofagos.

• Processo: 07/52266-3
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 2007
• Data de Término da vigência: 31 de janeiro de 2010
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Fisiologia - Fisiologia Geral
• Pesquisador responsável: Rui Curi
• Beneficiário: Rui Curi
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Ácidos graxos Peptídeos e proteínas de sinalização intracelular Fatores de transcrição Sinalização intracelular Interferência de RNA Fator de necrose tumoral alfa Monócitos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Acidos Graxos | Fator De Transcricao | Monocitos | Rna De Interferencia | Sinalizacao Intracelular | Tnf-Alfa

Resumo

O TNF-α é uma citocina regulatória multifuncional, envolvida na inflamação, sobrevivência celular, citotoxicidade, produção de outras citocinas como IL-6 e IL-1, e indução de resistência periférica à insulina. Portanto, é uma citocina de enorme importância para o organismo. TNF-α exerce seus efeitos biológicos ao se ligar a receptores do tipo 1 e 2 (TNF-RI e TNF-RII) e ativar diversas cascatas de sinalização, que controlam a morte ou sobrevivência da célula. O TNF-α é produzido por muitas células do sistema imune, especialmente os macrófagos. Embora a modulação da função de macrófagos por ácidos graxos, inclusive sobre a produção de TNF-α, tenha sido demonstrada por diversos autores existem poucos estudos sobre o mecanismo pelo qual estes efeitos ocorrem. Sabemos que os AG podem interferir em diversas etapas da sinalização intracelular alterando a funcionalidade das células. Neste projeto estudaremos os efeitos dos AG na sinalização intracelular desencadeada por LPS na indução da produção de TNF-α em linhagem de monócitos de camundongos (células J774) e na sinalização intracelular desencadeada por TNF-α nesta linhagem. Os AG avaliados serão: os ácidos palmítico (16:0) e oléico (18:1, n-9) que são os mais abundantes na circulação; os ácidos eicosapentaenóico (20:5, n-3) e docosa-hexaenóico (22:6, n-3), os principais constituintes dos óleos de peixe que têm enorme aplicação terapêutica, e o ácido linoléico (18:2, n-6), que é constituinte dos óleos de soja e milho sendo, portanto, um dos mais abundantes da dieta. Inicialmente será avaliada a produção de TNF-α após o tratamento com os ácidos graxos e a estimulação com LPS. Em seguida, avaliaremos a ativação de algumas proteínas envolvidas na sinalização intracelular de LPS como: MyD88, IRAK1, IKK, MEKK1, JNK e p38 e dos fatores de transcrição AP-1, c-jun e NF-κB. Também será avaliado o efeito dos ácidos graxos na indução de apoptose pelo TNF-α e a ativação de alguma proteínas envolvidas na sinalização intracelular de sobrevivência e morte desencadeada pelo TNF-α. Por fim serão realizados estudos de bloqueio de expressão da proteína Myd88 utilizando RNA de interferência. (AU)