Expressão gênica na glândula salivar de Bradysia hygida (Diptera, Sciaridae): a) caracterização do gene BhSGAMP-1, que codifica peptídeo antimicrobiano, e seu controle. b) a inibição da atividade gênica, pela 5-bromodesoxiuridina (5-BrdUrd), tem como alvo preferencial os genes amplificados

• Processo: 07/53654-7
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de dezembro de 2007
• Data de Término da vigência: 31 de março de 2010
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Morfologia - Citologia e Biologia Celular
• Pesquisador responsável: Jorge Cury de Almeida
• Beneficiário: Jorge Cury de Almeida
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Assunto(s): Diptera Bradysia hygida Glândulas salivares Peptídeos catiônicos antimicrobianos Amplificação de genes Bromodesoxiuridina
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Amplificacao Genica | Atividade Genica | Controle No Desenvolvimento | Glandula Salivar De Pepteros | Peptidios Antimicrobianos | 5-Bromodesoxiuridina

Resumo

a) Estamos estudando um gene, com características ainda não descritas em animais, ele codifica peptídio antimicrobiano de secreção, sua expressão é exclusiva da glândula salivar de larvas e é regulado no desenvolvimento. A atividade deste gene foi detectada durante a muda pupal. Se este peptídio é secretado na saliva, propomos que ele faça parte de um sistema de defesa preventivo, que mataria microorganismos patogênicos, criando uma zona de proteção no entorno do animal, quando as mudas ocorrem. Nestes períodos o tegumento "velho" é perdido e o "novo" ainda não maduro; portanto, o animal ficaria exposto ao ataque daqueles microorganismos. Objetivos: 1) produzir anticorpos policlonais contra o peptídio e traçar seu destino; 2) estudar o controle do gene: se a 20-OH ecdisona tem algum papel; seqüenciar o promotor do gene; 3) determinar se o gene está ativo durante a terceira muda larval; 4) procurar por outros genes que possam participar deste sistema de defesa; 5) testar o peptídio para uso clínico. b) A 5-bromodesoxiuridína (5-BrdUrd), um análogo da timidina, é incorporada ao DNA e foi muito estudada, anos atrás, por seu efeito inibidor sobre a diferenciação celular. Sabemos que em B.hygida o análogo, quando incorporado ao DNA impede a expansão dos pufes de DNA, dos cromossomos politênicos da glândula salivar. Propomos fazer uma investigação que envolverá o uso de diferentes anticorpos contra: o receptor da 20-OH ecdisona (EcR), RNA polimerase, DNA substituído por 5-BrdUrd, as proteínas BhC4-1 e BhBIO-1 (produtos de dois genes presentes em pufes de DNA); imunodetecção "in situ" e .em "Western blots", para estabelecer diretamente o efeito do análogo sobre a interação de deferentes moléculas envolvidas na atividade gênica. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

ZANAROTTI, GABRIELA MORILHA; CANDIDO-SILVA, JULIANA A.; DE ALMEIDA, JORGE CURY. BhSGAMP-1, a Gene That Encodes an Antimicrobial Peptide, Is Developmentally Regulated by the Direct Action of 20-OH Ecdysone in the Salivary Gland of Bradysia hygida (Diptera, Sciaridae). GENESIS, v. 47, n. 12, p. 847-857, DEC 2009. (07/53654-7, 01/13232-0)