Analise do efeito de prima-1 na expressao dos genes envolvidos na morte celular programada em linhagens de cancer de bexiga

• Processo: 09/52555-0
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de novembro de 2009
• Data de Término da vigência: 31 de outubro de 2011
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Humana e Médica
• Pesquisador responsável: Kátia Ramos Moreira Leite
• Beneficiário: Kátia Ramos Moreira Leite
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina (FM). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Apoptose Tratamento Neoplasias da bexiga p53
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Apoptose | Cancer De Bexiga | Prima-1 | P53 | Tratamento

Resumo

Demonstramos recentemente que as linhagens de câncer de bexiga BexBra2 e BexBra4, desenvolvidas em nosso laboratório (Projeto financiado FAPESP n° 2006/55151-0), tiveram surpreendente redução da viabilidade celular, por apoptose após exposição ao composto Prima-1 independentemente do status do gene p53. Nossos dados contrastam com a maioria dos achados da literatura que indicam restauro da função de p53 mutado sob ação de Prima-1 com conseqüente indução de apoptose. Sendo assim e, sabendo que os mecanismos responsáveis pela atividade preferencial de Prima-1 sobre as células p53 mutadas e as vias envolvidas na morte celular são pouco conhecidos, prosseguiremos nossa pesquisa avaliando a expressão dos genes envolvidos na morte celular mediada por p53, Bax, Bak, Puma, Noxa, MDM2 e das caspases bem como alterações no potencial da membrana mitocondrial e liberação do citocromo c em linhagens de câncer de bexiga antes e após tratamento com Prima-1. Para este fim utilizaremos as linhagens de câncer de bexiga desenvolvidas em nosso laboratório BexBral, BexBra2 e BexBra4 que serão avaliadas quanto ao status do gene p53 através da técnica de seqüenciamento. Serão então expostas ao composto Prima-1 nas concentrações de 10, 25 e 50μM. Utilizaremos a técnica de reação colorimétrica por Elisa para avaliarmos a indução da apoptose, análise das caspases 2, 3, 7, 8 e 9, potencial de membrana mitocondrial e liberação do citocromo-c pela membrana mitocondrial. A identificação da expressão dos genes Bax, Bak, Puma, Noxa, MDM2 será feita por reação em cadeia da polimerase em tempo real quantitativa (qRT-PCR). (AU)