Desenvolvimento de PCR em tempo real (PCR-RT) para detecção rápida de Escherichia coli diarreiogênica

• Processo: 08/11467-9
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 2009
• Data de Término da vigência: 30 de setembro de 2011
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Microbiologia - Biologia e Fisiologia dos Microorganismos
• Pesquisador responsável: Isabel Cristina Affonso Scaletsky
• Beneficiário: Isabel Cristina Affonso Scaletsky
• Instituição Sede: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Escherichia coli Citotoxicidade Diarreia Técnicas de diagnóstico molecular Reação em cadeia da polimerase em tempo real
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Diarréia | Escherichia coli | Rt-Pcr | Epidemiologia e detecção de E. coli diarreiogênica

Resumo

No Brasil, as Escherichia coli patogênicas ainda estão entre as causas mais importantes de diarreia aguda, particularmente em crianças. Com os conhecimentos biológicos, clínicos e epidemiológicos mais aprofundados, foram estabelecidas seis categorias diferentes de E. coli diarreiogênica (DEC): E. coli enteropatogênica (EPEC), E. coli enterotoxigênica (ETEC), E. coli enteroinvasora (EIEC), E. coli enterohemorrágica (EHEC), E. coli enteroagregativa (EAEC) e E. coli que adere difusamente (DAEC). A identificação das diferentes categorias de DEC representa um desafio, pois apenas o uso de testes bioquímicos e provas sorológicas na detecção de algumas categorias não é o suficiente. Portanto, devem ser utilizados testes fenotípicos, entre eles testes de aderência em células HEp-2 e ensaios de citotoxidade, e genotípicos como hibridização de ácidos nucléicos e reação em cadeia pela polimerase (PCR). Recentemente, foram desenvolvidos PCRs multiplex para a detecção das diferentes categorias de DEC numa única reação. A técnica de PCR em tempo real (PCR-RT) é o maior avanço em diagnostico molecular de infecções, que permite amplificação e detecção simultânea dos produtos de PCR, resultando na redução do risco de contaminação e no tempo de obtenção do resultado. Este projeto tem como objetivo adaptar ensaios de PCR multiplex desenvolvidos em nosso laboratório para a técnica PCR-RT, possibilitando uma detecção mais rápida de E. coli diarreiogênica. (AU)