Identificação bacteriana dos principais patógenos causadores de infecção de corrente sanguínea pela técnica da reação em cadeia da polimerase em tempo real de pacientes submetidos a transplantes de células-tronco hematopoiética

• Processo: 08/04761-8
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de fevereiro de 2009
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2011
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Microbiologia - Microbiologia Aplicada
• Pesquisador responsável: Antonio Carlos Campos Pignatari
• Beneficiário: Antonio Carlos Campos Pignatari
• Instituição Sede: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Infecções bacterianas Infecção hospitalar
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Identificação Bacteriana | Infecção De Corrente Sanguínea | PCR Tempo Real | resistência a antimicrobianos | Transplante De Celula Tronco Hematopoietica | Infecções hospitalares

Resumo

A morbi-mortalidade das doenças onco-hematológicas relaciona-se não apenas às diferentes formas de apresentação das mesmas, mas também às complicações decorrentes da imunossupressão, sobretudo as infecções e a toxicidade causada pelas drogas usadas para seu tratamento. A recuperação imunológica após o transplante e quimioterapia orienta a instituição na profilaxia antibacteriana, antiviral e antifúngica nesta população e indicam os agentes infecciosos mais relevantes (Walter et al., 1995). Aproximadamente 60% dos episódios de febre nos pacientes com neutropenia estão correlacionados a processos infecciosos e a infecção mais frequentemente documentada é a Infecção da Corrente Sanguínea (ICS). Os objetivos deste estudo serão a identificação dos principais patógenos de infecção de corrente sanguínea com a utilização da técnica da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) em Tempo Real a partir de amostras de sangue periférico coletadas em tubos com EDTA e frascos de hemocultura; descrever a epidemiologia relacionada às ICS e identificar os genes que codificam resistência aos antimicrobianos. Serão identificados os genes blaIMP, blaSPM, blaVIM que codificam as metallo-²-lactamases (MBL) e produzem resistência aos carbapenes. Os genes vanA e vanB que conferem resistência aos glicopeptideos. E os genes blaSHV, blaTEM, blaCTX que codificam as ²-lactamases de espectro ampliado (ESBL) e causam resistência as cefalosporinas. O gene mecA que confere resistência a meticilina. Serão avaliadas 20 amostras por mês, dentro deste número de 20 amostras estão inseridos uma amostra de hemocultura e uma de sangue periférico. As amostras serão provenientes de pacientes com infecção de corrente sanguíneos submetidos a transplantes de células-tronco hematopoiética internados na enfermaria da Hematologia do Hospital São Paulo e também de pacientes com intercorrências clinica pós-transplante. Inicialmente, a extração do DNA do microrganismo será realizada pela metodologia QIAamp DNA Mini Kit (Qiagen) para tubo com EDTA, e pela técnica do Brazol para os frascos de hemocultura positivos detectados pelos sistemas automatizados. A triagem para detecção dos principais patógenos será realizada pela técnica de PCR em Tempo Real pelo sistema Taqman, utilizando os genes 16S rRNA, para bactérias e o gene 28S rRNA para fungos e após positividade será realizado a técnica de PCR em Tempo Real pelo sistema TaqMan, para identificação do microrganismo. Para a determinação da espécie do microrganismo e da etiologia microbiana dos episódios de infecção de corrente sanguínea será realizada a amplificação dos genes 16S rRNA e 28S rRNA pela técnica da PCR, seguida pela reação de sequenciamento dos respectivos amplicons. (AU)