Estudo da estrutura e da função do gene do receptor do glicocorticoide humano em edenomas hipofisários produtores de ACTH

• Processo: 95/09920-5
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Jovens Pesquisadores
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 1996
• Data de Término da vigência: 31 de agosto de 2001
• Área do conhecimento: Ciências da Saúde - Medicina - Clínica Médica
• Pesquisador responsável: Margaret de Castro
• Beneficiário: Margaret de Castro
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Bolsa(s) vinculada(s): 97/05227-9 - Estudo da estrutura e função do gene do receptor do glicocorticóide humano em adenomas hipofisários produtores de ACTH, BP.TT; 96/09721-5 - Estudo da estrutura e da função do gene receptor do glicocorticoide humano em adenomas hipofisários produtores de ACTH, BP.JP
• Assunto(s): Doenças do sistema nervoso central Hipersecreção hipofisária de ACTH Cosintropina
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Acth | Gene | Glucocorticoide | Pcr | Receptor | Sequenciamento
• Publicação FAPESP: https://media.fapesp.br/bv/uploads/pdfs/Investindo...pesquisadores_562_371_372.pdf

Resumo

Muito pouco é conhecido sobre o mecanismo de interação do receptor do glicocorticoide humano (hGR) com os elementos negativos responsivos aos glicocorticoides (nGREs) ou com outros fatores de transcrição que regulam negativamente a expressão do gene da proopiomelanocortina (POMC). Estudos in vitro da região promotora do gene da POMC responsável pelos nGREs, em ratos, demonstraram que mutações localizadas nesta área resultaram em falência da supressão da transcrição deste gene, pelos glicocorticoides. Na Doença de Cushing, a alça do feedback negativo do eixo hipotálamo-hipófise-adrenal está rompido e a secreção de ACTH é originariamente resistente à retroalimentação negativa exercida pelos glicocorticoides. Portanto, um possível mecanismo para o fenômeno de resistência aos efeitos do glicocorticoide na Doença de Cushing poderia ser um defeito estrutural no receptor intracelular do glicocorticoide. O presente projeto propõe o estudo da estrutura e da função do gene do hGR em tumores hipofisários produtores de ACTH, com o intuito de melhor entender os mecanismos de resistência ao glicocorticoide e a patogênese da Doença de Cushing. Para tal, DNA será extraído de sangue periférico e de tumores de pacientes com Doença de Cushing, amplificado por PCR e analisados, através de sequenciamento direto, para defeitos no gene do receptor do glicocorticoide humano. A atividade de um possível mutante será testada in vitro em um ensaio de transfecção e co-transfecção. A determinação da afinidade de ligação do receptor normal e do receptor mutado à dexametasona será estudada através de ensaios de ligação ao receptor (Binding assays). Finalmente, usando Western Blot estudaremos a expressão das proteínas normal e mutada. (AU)