Estrutura e função de ATPases

• Processo: 95/09467-9
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Temático
• Data de Início da vigência: 01 de julho de 1996
• Data de Término da vigência: 28 de fevereiro de 2002
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Morfologia
• Pesquisador responsável: Sergio Verjovski Almeida
• Beneficiário: Sergio Verjovski Almeida
• Instituição Sede: Instituto de Química (IQ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Município da Instituição Sede: São Paulo
• Auxílio(s) vinculado(s): 02/02418-8 - Patente para o método de identificação do local de inserção de transposon ou retrovírus no genoma, AP.PAPI; 98/00967-7 - Marie Odile Parat Salvado | Pessoa Física (exterior - França) - França, AV.EXT; 97/05780-0 - Destabilization of mrna coding for phosphorylation-site mutants of a rabbit ca2+atpase expressed in yeast., AR.EXT; + mais auxílios vinculados 97/05859-5 - Paulo César de Carvalho ALVES | Univ federal rio janeiro/ufrj - Brasil, AV.BR; 96/06571-2 - Partial purification and immunohistochemical localization of ATP diphosphohydrolase from S. mansoni, PUB.ART; 96/06812-0 - Heterologous expression of sarcoplasmic reticulum Ca2+-ATPase, PUB.ART; 96/04906-7 - Partial purification of atp-diphosphohydrolase from schistosoma mansoni - immunological cross reactivities with potato apyrase and t.gondii nucleoside triphosphate hydrolase., AR.EXT - menos auxílios vinculados
• Bolsa(s) vinculada(s): 99/07509-7 - Expressão e caracterização de mutantes de triptofanos da Ca2+ATPase de retículo sarcoplasmático, BP.IC; 98/15660-4 - Construção e caracterização de minibibliotecas de EST de Schistossoma mansoni geradas com primers híbridos consenso-degenerado, BP.DR; 97/14653-1 - Clonagem e caracterização da ATP-difosfohidrolase de Schistosoma mansoni, BP.DR; 96/08730-0 - Caracterização por espectroscopia de fluorescência de mutantes de triptofanos em uma Ca+2 ATPase de retículo endoplasmático, BP.DR
• Assunto(s): Schistosoma mansoni
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Anticorpo Anti-Apirase | Calcio Atpase | Expressao Em Levedura | Schistosoma Mansoni

Resumo

Utilizamos a engenharia genética como ferramenta para o estudo da estrutura da Cálcio-ATPase de músculo e sua relação com a função. Estamos obtendo em levedura a expressão do cDNA que codifica a Cálcio-ATPase nativa da membrana do retículo sarcoplasmático de coelho e seus mutantes, que incluem a Cálcio-ATPase com "tag" de hexa-histidina amino-terminal, o que facilita sua purificação. Os domínios hidrofílicos da Cálcio-ATPase são também expressados em bacteria e purificados com sucesso. Medidas espectroscópicasde CD e fluorescência são usadas para estudar a estrutura dos domínios e sua estabilização por ligantes. O objetivo final é entender o mecanismo molecular de conversão de energia deste sistema de transporte iônico. Outra proteína de membrana que estudamos é a ATP-difosfohidrolase (ou apirase) da face externa do tegumento de Schistosoma mansoni, uma nova enzima que identificamos em 1993 e que pertence a uma nova familia de ecto-ATPases que identificamos em 1996. Atualmente estamos a caminho da clonagem da enzima de S. mansoni. O objetivo é caracterizar sua sequência primária e identificar domínios funcionais. No momento postulamos que a enzima pode participar dos mecanismos de escape do parasita, degradando ADPna sua superfície externa. Esta enzima pode ser um alvo para drogas ou vacina; a longo prazo o objetivo do trabalho é estabelecer o papel da enzima na interação parasita-hospedeiro e explorar a sua adequação comoalvo para tratamento de pacientes infectados. (AU)