The in vitro antifungal activity of flavonoids against Trichophyton rubrum is due to the inhibition of fatty acid synthase and a reduction in ergosterol content

• Processo: 13/18863-5
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Publicações científicas - Artigo
• Data de Início da vigência: 01 de outubro de 2013
• Data de Término da vigência: 31 de março de 2014
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
• Pesquisador responsável: Ana Lucia Fachin Saltoratto
• Beneficiário: Ana Lucia Fachin Saltoratto
• Instituição Sede: Universidade de Ribeirão Preto (UNAERP). Campus Ribeirão Preto. Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Assunto(s): Ergosterol Trichophyton rubrum Antifúngicos Expressão gênica Chalconas Arthrodermataceae Dermatófitos Ácido graxo sintases
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: acido graxo sintase | Antifungicos | Chalconas | Dermatófitos | ergosterol | Trichophyton rubrum | expressão gênica

Resumo

IntroduçãoA enzima ácido graxo sintase é um alvo antifúngico promissor devido a sua diferença estrutural entre célula de fungos e mamíferos. O objetivo desse estudo foi avaliar a atividade antifúngica de flavonoídes descritos na literatura científica como inibidores da FAS (quercetina, trans-chalcona, ácido elágico, luteolina, galangina e genisteina) contra o dermatófito Trichophyton rubrum e seus efeitos na síntese de ácido graxo e ergosterol. Métodos A atividade antifúngica dos produtos naturais foram testados através de um método de microdiluição para determinação da concentração inibitória mínima(CIM). O efeito dos compostos na membrana celular foi avaliada usando o ensaio de regeneração de protoplastos. O conteúdo de ergosterol foi quantificado por espectrofotometria. A inibição da FAS pelos flavonoídes foi avaliada por um ensaio enzimático para deteminar os valores de IC50. O RT-PCR Quantitativo foi utilizado para medir os níveis de expressão dos genes FAS1 e ERG6 envolvidos na biossíntese do ácido graxo e ergosterol, respectivamente durante a exposição de T.rubrum aos flavonoídes testados. Resultados Os flavonoides quercetina e trans-chalcona foram efetivos contra T. rubrum, com valores de CIM de 125 e 7,5 µg/mL para a linhagem selvagem (MYA3108) e CIM de 63 e 1,9 µg/mL para a linhagem mutante (deltaTruMDR2), respectivamente. Os CIMs dos controles fluconazol e cerulenina foram 63 e 125 µg/mL para a linhagem selvagem e 30 e 15 µg/mL para a linhagem mutante, respectivamente. Quercetina e trans-chalcona também reduziram o conteúdo de ergosterol na duas linhagens, indicando que este composto interfere na síntese do ácido graxo e ergosterol causando disrupção da membrana celular. O CIM da quercetina reduziu o número de protoplastos regenerados em 30.26% (linhagem selvagem) e 91.66% (para a linhagem mutante). Metade do CIM (0.5 CIM) de quercetina não reduziu o número de colônias fúngicas regeneradas na linhagem selvagem , mas causou uma reduçao de 36.19% no número de protoplastos regenerados na linhagem mutante. Em contraste, o valor do CIM e 0.5 CIM de trans-chalcona e cerulenina reduziram drasticamente a regeneração dos protoplastos nas duas linhagens. O gene FAS1 foi reprimido na presença do CIM da quercetina, trans-chalcona, fluconazol e cerulenina. O gene ERG6 foi induzido na presença do CIM de fluconazol e cerulenina e foi reprimido na presença do CIM de trans-chalcona e quercetina. Trans-chalcona e quercetina inibiram a atividade enzimatica da FAS, com valor de IC50 de 68,23 e 17,1 µg/mL, respectivamente.ConclusãoTrans-chalcona e quercetina mostraram atividade antifúngica contra T. rubrum, reduziram os níveis de ergosterol e e modularam a expressão dos genes FAS1 e ERG6. (AU)