Development of a One-Step SYBR Green I Real-Time RT-PCR Assay for the Detection and Quantitation of Araraquara and Rio Mamore Hantavirus

• Processo: 13/19930-8
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Publicações científicas - Artigo
• Data de Início da vigência: 01 de novembro de 2013
• Data de Término da vigência: 30 de abril de 2014
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Microbiologia
• Pesquisador responsável: Luiz Tadeu Moraes Figueiredo
• Beneficiário: Luiz Tadeu Moraes Figueiredo
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Assunto(s): Virologia
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Araraquara virus | Hantaviruses | real-time quantitative RT-PCR | Rio Mamore virus | SYBR green I | Virologia

Resumo

Hantavírus são membros da família Bunyaviridae e são uma causa emergente de doenças em todo o mundo, com alta letalidade nas Américas. No Brasil, o diagnóstico de hantavirose é baseado em técnicas imunológicas associadas à RT-PCR convencional. Uma nova etapa SYBR Green em tempo real de RT-PCR foi desenvolvido para a detecção e quantificação de hantavírus Araraquara (ARAV) e hantavírus Rio Mamoré (RIOMV). O limite de detecção do ensaio foi de 10 cópias/mL de RNA transcrito in vitro do segmento de S. A especificidade do ensaio foi avaliada por análise de curva de fusão, o qual mostrou que o vírus produto amplificado ARAV gerado um pico de fusão a 80,83 ± 0,89°C sem gerar dimeros de primers ou de produtos não específicos. O ensaio mostrou ser mais sensível do que a RT-PCR convencional, e foram detectadas duas amostras não detectados por RT-PCR convencional. O SYBR um passo Green-quantitativa em tempo real RT-PCR é específica, sensível e reprodutível, o que o torna uma ferramenta poderosa em ambas as aplicações de diagnóstico e pesquisa geral de ARAV e RIOMV e, possivelmente, outros hantavírus brasileiros. (AU)