Aptâmeros anti-rank-l associados a nanovetores para utilização de terapias celulares sítio-dirigidas

• Processo: 14/50198-4
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Pesquisa Inovativa em Pequenas Empresas - PIPE
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 2014
• Data de Término da vigência: 30 de junho de 2015
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Farmacologia - Farmacologia Bioquímica e Molecular
• Pesquisador responsável: Paulo Peitl Junior
• Beneficiário: Paulo Peitl Junior
• Empresa: Dnapta Biotecnologia Ltda
• Município: São José do Rio Preto
• Bolsa(s) vinculada(s): 15/05148-1 - Síntese e caracterização de nanodispositivos bioresponsivos para liberação sítio dirigida de siRNA para o tratamento da artrite reumatóide, BP.PD
• Assunto(s): Terapia baseada em transplante de células e tecidos Técnica de seleção de aptâmeros
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Aptameros | Nanovetores | Rank-L | Selex | Terapia Celular

Resumo

A emergente integração de desenvolvimentos de aptâmeros com a nanotecnologia e biologia química tem sido visionada entre as mais promissoras e versáteis metodologias a serem utilizadas nos tratamentos sitio-dirigidos e na terapia celular de doenças humanas. O tratamento sítio dirigido mediado por ligantes (Aptâmeros) pode direcionar a entrega de moléculas (siRNA) carreadas por nanovetores diretamente às células alteradas, responsáveis pela doença que super expressam o alvo molecular. O projeto proposto tem como objetivo principal o desenvolvimento de aptâmeros com alta capacidade/afinidade de ligação ao ligante do Receptor Ativador do Fator nuclear Kappa B (RANKL) para direcionar a entrega de RNAs de interferência, inicialmente siRNA-TNFa, por nanovetores derivados de quitosanas. Os alvos escolhidos para o projeto RANKL e TNF-α estão envolvidos em diferentes tipos de enfermidades humanas o que confere um grande potencial farmacológico para as nanomoléculas a serem desenvolvidas. Nesta fase as moléculas sintetizadas terão sua efetividade avaliadas em osteblastos cultivados in vitro, uma vez que alterações na expressão e no metabolismo do RANKL nessas células estão relacionadas com o desenvolvimento da artrite reumatóide e da osteoporose que poderão ser futuramente (Fase 2) utilizadas como sistemas teste in vivo. Essa capacidade de ligação ao RANKL serão avaliados por western (SDS-PAGE) e dot blot, citometria de fluxo e microscopia fluorescente nos osteoclastos in vitro. Da mesma forma a funcionabilidade das moléculas após a internalização dos siRNA e silenciamento da expressão do TNF-α, serão verificadas em diferentes parâmetros e metodologias como citometria de fluxo (apoptose e ciclo celular) e PCR em tempo real (expressão gênica). O sucesso das metas e objetivos a serem alcançados com o desenvolvimento do projeto proposto oferecerá a possibilidade de novas terapias com uma tecnologia inovadora nacional para a osteoporose, uma doença crônica e incapacitante. Além disso, proporcionará um o grande impacto clínico e social pela redução no custo financeiro de importação para o país com respeito aos tratamentos biológicos atuais. Por fim, a estratégia de estudo adotada foi estabelecida devido à experiência reconhecida do grupo nas áreas de seleção de aptâmeros, desenvolvimento de nanocompostos, inflamação e o fácil acesso à sistemas testes in vivo é in vitro já firmado com colaboradores. (AU)