Nested PCR multiplex na detecção e identificação de espécies de Candida em amostras sanguíneas de pacientes pediátricos criticamente enfermos

• Processo: 14/15641-4
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Publicações científicas - Artigo
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2014
• Data de Término da vigência: 28 de fevereiro de 2015
• Área do conhecimento: Ciências da Saúde - Medicina - Clínica Médica
• Pesquisador responsável: Gilda Maria Barbaro Del Negro
• Beneficiário: Gilda Maria Barbaro Del Negro
• Instituição Sede: Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da USP (HCFMUSP). Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Técnicas e procedimentos diagnósticos Reação em cadeia por polimerase (PCR) Doenças transmissíveis Candidemia Candida Unidades de terapia intensiva pediátrica Publicações de divulgação científica Artigo científico
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Candida spp | Candidemia | diagnóstico | PCR multiplex | UTI Pediatrica | Doenças Infecciosas

Resumo

Episódios de candidemia em ambiente hospitalar estão associados a elevados índices de mortalidade em pacientes pediátricos gravemente doentes. Assim, a detecção e identificação precoces do agente infeccioso é crucial para o sucesso da intervenção médica. Técnicas baseadas em amplificação do tipo PCR têm melhorado significativamente a detecção de espécies de Candida em infecções de corrente sanguínea. Neste estudo, foi desenvolvida uma multiplex nested PCR para diagnóstico de candidemia em pacientes mantidos em unidades de cuidados intensivos neonatal e pediátricas. Amostras de DNA provenientes de sangue de 54 neonatos e crianças hospitalizadas em unidades de cuidados intensivos e com suspeita de candidemia, foram avaliadas pela técnica de multiplex nested PCR, empregando primers específicos para identificar sete espécies de Candida; os resultados foram comparados com os obtidos nas hemoculturas. A técnica de multiplex nested PCR apresentou limite de detecção de 4 (quatro) genomas de Candida/mL de sangue para todas as espécies avaliadas. As hemoculturas foram positivas em 14,8% dos pacientes, enquanto a multiplex nested PCR foi positiva em 24%, incluindo todos os pacientes com hemoculturas positivas. Os resultados obtidos pela técnica molecular estavam disponíveis no período de 24 horas. A técnica de PCR foi capaz de identificar as espécies de Candida com 100% de concordância com as hemoculturas, além de detectar candidemia causada por duas espécies de Candida em três pacientes. O método molecular proposto representa uma ferramenta efetiva para detecção e identificação de espécies de Candida no contexto do diagnóstico de candidemia em crianças, demonstrando elevada sensibilidade de detecção e capacidade de identificar as espécies mais frequentes envolvidas em episódios e candidemia. (AU)