| Processo: | 14/22983-9 |
| Modalidade de apoio: | Auxílio à Pesquisa - Regular |
| Data de Início da vigência: | 01 de maio de 2015 |
| Data de Término da vigência: | 30 de abril de 2017 |
| Área do conhecimento: | Ciências Exatas e da Terra - Química - Físico-química |
| Pesquisador responsável: | Fernando Carlos Giacomelli |
| Beneficiário: | Fernando Carlos Giacomelli |
| Instituição Sede: | Centro de Ciências Naturais e Humanas (CCNH). Universidade Federal do ABC (UFABC). Santo André , SP, Brasil |
| Município da Instituição Sede: | Santo André |
| Assunto(s): | Terapia genética Copolímeros Química supramolecular Espalhamento Auto-organização Coloides |
| Palavra(s)-Chave do Pesquisador: | Colóides e Interfaces | espalhamento de luz | Polímeros | Poliplexos | Sistemas auto-organizados | Colóides e Interfaces |
Resumo
O projeto de pesquisa propõe a fabricação de sistemas supramoleculares nanoestruturados do tipo poliplexo a partir de DNA complexado aos copolímeros catiônicos PEO113-b-PDEAEMA50, PEO113-b-PDPA50, PEOGMA113-b-PDAMA50 e POEGMA-b-P(OEGMA-r-DEAEMA-r-DPAEMA)50. Esta interação possibilita a formação de agregados supramoleculares que possuem potencial aplicação em terapias genéticas. A complexação de diferentes polímeros catiônicos com DNA será investigada utilizando-se as técnicas de calorimetria de titulação isotérmica (ITC) e espectroscopia de correlação de fluorescência (FCS). Os dados de ITC possibilitarão avaliar a complexação do ponto de vista termodinâmico, e os dados de FCS possibilitarão avaliar o mesmo processo do ponto de vista estrutural. Em paralelo, possíveis mudanças conformacionais na cadeia de DNA provocadas pela complexação serão verificadas através de medidas de dicroísmo circular (CD). Os aspectos físico-químicos dos poliplexos produzidos serão determinados utilizando-se técnicas de espalhamento de radiação: SDLS - espalhamento de luz dinâmico e estático, ELS - espalhamento de luz eletroforético e SAXS - espalhamento de raios-X a baixo-ângulo, além de análise morfológica por meio de medidas de microscopia de força atômica (AFM). Após a otimização das condições experimentais, a absorção celular, citotoxicidade e localização subcelular de sistemas poliplexos selecionados são avaliadas por meio de medidas de citometria de fluxo e microscopia de fluorescência confocal utilizando DNA marcado com a sonda YOYO-1. Os ensaios de eficiência de transfecção serão realizados utilizando-se o plasmídeo pEGFP-N1 que codifica GPF (green fluorescente protein). (AU)
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