Utilização da espectrometria de massas para controle de qualidade de meios de cultivo e do soro fetal bovino utilizado para a produção in vitro de embriões bovinos

• Processo: 07/01400-1
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Pesquisa Inovativa em Pequenas Empresas - PIPE
• Data de Início da vigência: 01 de outubro de 2007
• Data de Término da vigência: 30 de abril de 2008
• Área do conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
• Pesquisador responsável: Christina Ramires Ferreira
• Beneficiário: Christina Ramires Ferreira
• Pesquisadores associados: Gustavo Henrique Martins Ferreira de Souza ; Marcos Nogueira Eberlin
• Bolsa(s) vinculada(s): 07/01458-0 - Utilização da espectrometria de massas para controle de qualidade de meios de cultivo e do soro fetal bovino utilizado para a produção in vitro de embriões bovinos, BP.PIPE
• Assunto(s): Espectrometria de massas Controle da qualidade Técnicas in vitro Embrião de animal Bovinos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Bovino | Controle De Qualidade | Embiao | Espectrometria De Massas | Meio Cultivo | Producao In Vitro | Produção In Vitro de Embriões Bovinos

Resumo

A América Latina, em especial o Brasil, produz atualmente quase metade do número de embriões bovinos por fertilização in vitro (FVV) no mundo. Como forma de controle de qualidade, os meios utilizados para a produção in vitro (PIV) de bovinos são submetidos à medição do pH e da osmolaridade. Em algumas situações, avalia-se também a taxa de desenvolvimento embrionário de oócitos obtidos a partir de ovários de abatedouro. Os meios de PIV são misturas complexas de sais, proteínas, hormônios, carboidratos e vitaminas, os quais poder ter sua composição alterada devido à utilização constante, à forma de armazenamento dos reagentes, e mesmo devido a erros técnicos durante sua preparação. As conseqüências podem envolver diminuição ou até ausência de desenvolvimento embrionário, causando prejuízos econômicos no sistema de PIV comercial. A espectrometria de massas (MS) é uma ferramenta analítica altamente sensível, utilizada para a identificação de compostos desconhecidos, para a quantificação de espécies moleculares orgânicas, inorgânicas e complexas, e para elucidar a estrutura e as propriedades químicas moléculas de interesse. Utilizando-se MS, compostos-alvo podem ser identificados em concentrações extremamente baixas (femtomols) em misturas quimicamente complexas. A técnica de Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization (MALDI) foi desenvolvida para a ionização de polipeptídeos extensos e proteínas, mas sua aplicação foi estendida para glicoproteínas, oligonucleotídeos e carboidratos complexos. Uma grande vantagem da técnica de MALDI - Time of Flight (TOF) é que o processo de ionização branda causa fragmentação molecular mínima, permitindo a identificação de íons moleculares de analitos, mesmo em misturas. Esse projeto propõe o uso de espectrômetro de massas com a fonte de ionização MALDI - TOF como forma de controle de qualidade para os meios de PIV bovina. Serão obtidos perfis de relação massa/carga (m/z) dos constituintes dos meios (1) de maturação in vitro, (2) meio de FIV, (3) meio de CIV e (4) meio de transporte de embriões para transferência em vacas receptoras. Os íons obtidos serão comparados levando-se em conta o decorrer do tempo de armazenamento (0, 3, 7, 10 e 14 dias) a 4ºC. Também serão avaliadas 7 partidas de soro fetal bovino (SFB), o suplemento mais crítico do processo de PIV. Os resultados serão relacionados com os dados de produção de embriões utilizando-se oócitos obtidos a partir de ovários de abatedouro nos meios analisados por MALDI-TOF. Ainda será avaliada com a sensibilidade do MALDI-TOF as 16 alterações propositais na composição dos meios. Com a elaboração de espectros provenientes da subtração das intensidades dos íons observados em diferentes períodos de tempo, será possível identificar os componentes marcadores da qualidade do meio, estabelecendo um método abrangente e rápido de avaliação de qualidade e prazo de validade dos meios para a PIV de embriões bovinos. Em relação ao SFB, será definido um perfil ou alguns íons relacionados às melhores taxas de desenvolvimento embrionário. Os experimentos iniciais, relatados nesse projeto, demonstraram a obtenção de espectros consistentes, com presença de vários íons com intensidades absolutas significativas e sem a necessidade de processamento prévio da amostra. Dessa forma pretende-se desenvolver um sistema simples, rápido e direto (pouco ou nenhum tratamento da amostra) para garantir comercialmente a qualidade dos meios utilizados na produção in vitro de embriões, já que a empresa In Vitro Brasil Ltda. Produz os meios semanalmente em grande quantidade e os vende a duas filiais e a dois laboratórios parceiros. A possibilidade de CQ dos meios proporcionaria maior segurança para a expansão do sistema de distribuição dos meios, uma vez que esse produto influencia em grande parte o sucesso do processo de PIV. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

FERREIRA, CHRISTINA RAMIRES; MARTINS FERREIRA SOUZA, GUSTAVO HENRIQUE; RICCIO, MARIA FRANCESCA; CATHARINO, RODRIGO RAMOS; FORTES PONTES, JOSE HENRIQUE; BASSO, ANDREA CRISTINA; ERENO JUNIOR, JOSE CARLOS; PERECIN, FELIPE; EBERLIN, MARCOS NOGUEIRA. Mass spectrometry fingerprinting of media used for in vitro production of bovine embryos. RAPID COMMUNICATIONS IN MASS SPECTROMETRY, v. 23, n. 9, p. 1313-1320, MAY 2009. (07/01400-1)