FAM3B/PANDER inhibits cell death and increases prostate tumor growth by modulating the expression of Bcl-2 and Bcl-XL cell survival genes

• Processo: 17/17062-0
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Publicações científicas - Artigo
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2017
• Data de Término da vigência: 31 de maio de 2018
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Humberto Miguel Garay Malpartida
• Beneficiário: Humberto Miguel Garay Malpartida
• Instituição Sede: Escola de Artes, Ciências e Humanidades (EACH). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Neoplasias da próstata Morte celular Citocinas
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Câncer de Próstata | citocinas | Fam3 | morte celular | Biologia molecular do cancer

Resumo

Introdução: FAM3B / PANDER é uma nova proteína tipo citocina que induz a apoptose em células beta secretoras de insulina. Uma vez que os dados in silico revelaram que a FAM3B pode ser expressa em tumores da próstata, avaliamos o papel putativo dessa citocina na progressão do tumor da próstata.Métodos: a expressão de FAM3B foi analisada por PCR quantitativo em amostras clínicas de tecido tumoral e linhas celulares tumorais de próstata LnCAP, PC-3 e DU145. O crescimento e a viabilidade da cultura da linha celular DU145 foram avaliados após o tratamento com proteína FAM3B exógena obtida a partir de meio condicionado (CM) de células 293T que sobreexpressam FAM3B ou uma proteína recombinante FAM3B produzida num hospedeiro bacteriano. As células DU145 que sobreexpressam a proteína FAM3B foram produzidas por transdução mediada por lentivírus do cDNA do FAM3B completo. A viabilidade celular e a apoptose foram analisadas nas células DU145 / FAM3B após o tratamento com vários indutores de morte celular, tais como condições de TNF-alfa, estaurosporina, etóposideo, camptotecina e carência de soro. O crescimento independente de ancoragem no ensaio de agarose foi utilizado para avaliar a tumorigenicidade in vitro. A tumorigenicidade in vivo e a invasividade foram avaliadas pelo crescimento de xenotransplante de tumores em camundongos imunodeficientesResultados: Observamos um aumento na expressão de FAM3B em amostras de tumor de próstata com alto grau histológico e mau prognóstico quando comparados aos tecidos normais. O FAM3B foi altamente expresso pelas células LnCAP, mas muito menos nas células PC-3 e DU145. A viabilidade celular DU145 e a sobrevida aumentaram após o tratamento exógeno com proteína FAM3B recombinante ou CM contendo proteína secreta FAM3B. A superexpressão de FAM3B nas células DU145 promoveu a inibição da fragmentação do DNA e da externalização da fosfatidilserina de forma tempo e dose-dependente, após a apoptose desencadeada pelo TNF-alfa. Esses eventos foram acompanhados por aumento da expressão gênica de Bcl-2 anti-apoptótico e Bcl-XL, diminuição da expressão de Bax pro-apoptótica e atividades proteolíticas diminuídas de caspase-3, -8 e -9. Além disso, a inibição de proteínas anti-apoptóticas da família Bcl-2 com antagonistas diminui os efeitos protetores de FAM3B em células DU145. Quando comparados aos respectivos controles, as células que sobre-expressam FAM3B mostraram um crescimento independente de ancoragem diminuído in vitro e aumentaram o crescimento tumoral em camundongos nus xenografados. A análise de imuno-histoquímica de tumorais dissecados revelou um fenótipo anti-apoptótico semelhante exibido pelas células tumorais que sobreexpressão FAM3B.Conclusões: Considerando estes dados, ao ativar mecanismos de sobrevivência avançada, a sobre-expressão de FAM3B contribui para aumentar a resistência à morte celular e ao crescimento tumoral em camundongos imuno-deficientes, demonstrando um possível papel desta citocina na progressão do câncer de próstata. (AU)