Geração e expressão de mutantes delecionais e pontuais da proteína reguladora humana Ki-1/57 para estudos funcionais e estruturais

• Processo: 06/04745-7
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado Direto
• Data de Início da vigência: 01 de fevereiro de 2007
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2011
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Jörg Kobarg
• Beneficiário: Kaliandra de Almeida Gonçalves
• Instituição Sede: Associação Brasileira de Tecnologia de Luz Síncrotron (ABTLuS). Ministério da Ciência, Tecnologia e Inovação (Brasil). Campinas , SP, Brasil
• Assunto(s): Expressão de proteínas Deleção de genes Oncoproteínas Transdução de sinais
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Interacao Entre Proteinas | Mecanismos De Sinalizacao | Onco-Proteina | Proteina Reguladora | Função e estrutura de proteínas

Resumo

O antígeno Ki-1/57 foi identificado por um anticorpo monoclonal, Ki-1, que detectou especificamente células malignas de Hodgkin e células Sternberg-Reed no linfoma de Hodgkin. Este anticorpo detectou além de Ki-1/57, uma proteína intracelular de 57 kDa, um outro antígeno: uma glicoproteína de superfície de membrana de 120 kDa chamada CD30. O antígeno Ki-1/57 é associado com atividade de quinase e mostrou-se fosforilado em resíduos de serina e treonina. Análises de microscopia eletrônica demonstraram que o antígeno Ki-1/57 não está localizado apenas no citoplasma, mas também nos poros nucleares e no núcleo, associado ao nucléolo. O antígeno Ki-1/57 é expresso em células de uma variedade de tipos de câncer (ex. linfoma de células T, adenocarcinoma, carcinoma de próstata, carcinoma de bexiga), sendo também expresso em leucócitos do sangue humano ativados com mitógenos, mas não em células não ativadas. Em estudos de doplo híbrido em levedura recentemente realizados no nosso grupo identificamos várias proteínas que interagem com a proteína Ki-1/57 que na sua maioria representam proteínas funcionalmente associadas á regulação da transcrição. Duas delas são a proteína adaptadora RACK-1 e a proteína p53 que está relacionada com o mecanismo de verificação de mutações na seqüência de DNA das células. O objetivo deste projeto é o estudo funcional e estrutural da proteína Ki-1/57. Os estudos funcionais envolvem a mutagenese através da técnica de Duplo Híbrido Reverso que permitirá saber qual (ou quais) aminoácidos específicos estão envolvidos na interação de Ki-1/57 com as proteínas RACK-1 e p53. Além disso iremos fazer microarray para análise de expressão gênica em células superexpressando a proteína Ki-1/57. Na parte estrutural serão feitos ensaios de proteólise limitada com a proteína 6xHis-Ki-1/57 expressa na bactéria ou no sistema de Báculo vírus para achar um domínio / núcleo estável da proteína, caracterização e utilização deste núcleo através de espectrometria de massas. Novas proteínas delecionais da Ki-1/57 serão posteriormente empregadas em ensaios de cristalização e para outros ensaios in vitro. (AU)

Publicações acadêmicas

(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)

GONÇALVES, Kaliandra de Almeida. Estudos funcionais da proteína reguladora humana Ki-1/57 e seus parceiros de interação. 2011. Tese de Doutorado - Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Instituto de Biologia Campinas, SP.