Producao e caracterizacao bioquimica das oligopeptidases neurolisina e timet oligopeptidase contendo mutacoes sitio dirigidas em possiveis sitios de interacao com substratos.

• Processo: 05/56952-3
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de janeiro de 2006
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2008
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Enzimologia
• Pesquisador responsável: Luiz Juliano Neto
• Beneficiário: Mauricio Ferreira Marcondes Machado
• Instituição Sede: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 03/09994-7 - Substratos e inibidores peptídicos para enzimas proteolíticas, AP.PRNX.TEM
• Assunto(s): Cinética Proteólise
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Cinetica | Endooligopeptidases | Neurolisina | Proteolise | Thimet

Resumo

O presente projeto de pesquisa tem como tema central o estudo da especificidade das oligopeptidases timet oligopeptidase (TOP, EC 3.4.24.15) e neurolisina (EC 3.4.24.16). Pretendemos aliar os conhecimentos de estudos anteriores de especificidade com as estruturas cristalográficas da neurolisina e da TOP para a produção de enzimas contendo mutações sítio dirigidas para novos estudos cinéticos de especificidade direcionados e fundamentados nas citadas estruturas tridimensionais disponíveis. Essas novas peptídases mutantes somadas aos mutantes produzidos em estudos anteriores devem ser estudados e caracterizados comparativamente em relação às respectivas peptidases selvagens. As estruturas 3D da neurolisina e da TOP mostraram que essas peptidases têm seus sítios de interação com o substrato formado principalmente por alças potencialmente flexíveis. O estudo dessas porções, portanto é de fundamental importância para a definição de seus mecanismos de hidrólise. Dentre essas regiões potencialmente flexíveis, a alça composta dos resíduos 600-612. (neurolisina) e 599-611 (TOP), que possivelmente interage com a cadeia lateral do resíduo P1 do substrato, se destaca. Assim, o principal objetivo desse projeto é verificar a influência de resíduos específicos presentes nessa alça flexível das oligopeptidases neurolisina e TOP sobre a hidrólise de substratos específicos. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

MACHADO, MAURÍCIO F. M.; RIOLI, VANESSA; DALIO, FERNANDA M.; CASTRO, LEANDRO M.; JULIANO, MARIA A.; TERSARIOL, IVARNE L.; FERRO, EMER S.; JULIANO, LUIZ; OLIVEIRA, VITOR. The role of Tyr(605) and Ala(607) of thimet oligopeptidase and Tyr(606) and Gly(608) of neurolysin in substrate hydrolysis and inhibitor binding. Biochemical Journal, v. 404, n. 2, p. 279-288, June 2007. (05/56952-3)