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Analise molecular e ultraestrutural da via de secrecao nao convencional das endooligopeptidases neurolisina (ec3.4.24.16) e "thimet oligopeptidase" (ec3.4.24.15).

Processo: 01/07319-5
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Doutorado
Vigência (Início): 01 de outubro de 2001
Vigência (Término): 30 de setembro de 2004
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Morfologia - Citologia e Biologia Celular
Pesquisador responsável:Emer Suavinho Ferro
Beneficiário:Flavia Regina Carreno
Instituição-sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
Assunto(s):Metaloendopeptidases

Resumo

Nesse projeto estamos propondo estudar a via de secreção alternativa das endooligopeptidases neurolisina (EC 3.4.24.16) e thimet-oligopeptidase (EC 3.4.24.15), uma vez que as mesmas são produzidas sem um peptídeo sinal de entrada convencional no retículo endoplasmático rugoso. Para que possamos entender esse mecanismo secretório, pretendemos transfectar células secretoras com essas endopeptidases modificadas estruturalmente, através de manipulação do cDNA correspondente. A princípio propomos gerar hemi-enzimas com deleções na região amino-terminal, e posteriormente através de mutações sítio-dirigidas, pretendemos caracterizar os aminoácidos importantes no processo de secreção dessas duas endopeptidases. Essas construções serão transfectadas em células secretoras AtT20 de pituitária anterior de camundongo e por imunocitoquímica para microscopia confocal e/ou eletrônica de transmissão, poderemos correlacionar os efeitos das alterações estruturais sobre a localização subcelular dessas enzimas. A presença dessas enzimas (contendo ou não deleções e/ou mutações) no meio de cultura (secreção) será avaliada por medida da atividade enzimática e/ou Western blot. (AU)

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Publicações científicas
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
CARRENO, FLÁVIA R.; GONI, CAMILA N.; CASTRO, LEANDRO M.; FERRO, EMER S. 14-3-3 epsilon modulates the stimulated secretion of endopeptidase 24.15. Journal of Neurochemistry, v. 93, n. 1, p. 10-25, Apr. 2005.

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