Identificacao de alteracoes proteina-proteina envolvendo a endopeptidase ec 3.4.24.15 no sistema nervoso central, utilizando o "two hibridy system".

Resumo

O estudo da distribuição ultraestrutural da EP 24.15 por imunohistoquímica para microscopia eletrônica, tem revelado que está proteína está associada com a superfície externa de estruturas vesiculares, no sistema nervoso central de ratos. Uma vez que a EP24.15 não possui regiões hidrofóbicas para transpor as membranas lipídicas, pretende-se identificar possíveis interações do tipo proteína-proteína, que possam estar intermediando esse processo. Para isso será utilizado o modelo do "Two Hybrid System", que é baseado na expressão de dois domínios separados e funcionalmente essenciais para a ativação do gene da beta-galactosidase em leveduras. Nesse projeto nosso objetivo é ligar a EP 24.15 a um desses domínios, e proteínas vindas de uma biblioteca de cDNA de cérebro ao outro domínio. Quando os dois plasmídeos forem co-transfectados em leveduras, e houver ativação da transcrição do gene da betagalactosidades, poderemos identificar possíveis proteínas que interagem com a EP 24.15. (AU)