Isolamento, cultivo e potencial de diferenciacao de celulas tronco embrionarias felinas derivadas de embrioes piv e partenogeneticos.

• Processo: 07/53558-8
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2007
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2009
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
• Pesquisador responsável: Fernanda da Cruz Landim
• Beneficiário: Tatiana da Silva Rascado
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia (FMVZ). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu , SP, Brasil
• Assunto(s): Partenogênese Células-tronco embrionárias Pluripotência Felidae
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Celulas Tronco Embrionarias | Felino | Nanog | Oct R | Partenogenese | Pluripotencia

Resumo

Este projeto objetiva isolar, cultivar e comparar a capacidade de diferenciação in vivo das células tronco embrionárias obtidas de embriões PIV e partenogenéticos. Para a realização deste experimento serão utilizadas gatas púberes, as quais serão castradas e seus ovários submetidos a slicing para obtenção dos complexos cumulus oophorus (CCO). Os CCO serão lavados e, posteriormente, maturados durante 36 horas. Parte desses oócitos serão fertilizados e incubados por 22 horas, sendo cultivados durante sete dias. O restante passará por processo de ativação obedecendo o mesmo período de cultivo. A massa celular interna dos blastocistos iniciais obtidos de ambos os grupos será isolada por microcirurgia e implantada sobre a monocamada de fibroblastos felinos inativados previamente preparada em placas de cultivo banhadas com solução contendo gelatina de pele de suíno a 0,1%, onde serão cultivadas. A cada 10 dias as colônias estabelecidas serão repicadas e após 10 repiques as linhas celulares serão congeladas. Para analisar as condições de cultivo, a viabilidade celular será avaliada por citometria de fluxo e pelos corantes Hoescht 33342 e lodeto de Propídeo. A plasticidade das linhas celulares será confirmada pela expressão gênica dos genes Oct 4 e Nanog e a capacidade de diferenciação de ambos tipos celulares será comparado através da análise histopatológica dos teratomas formados quando as células forem inoculadas em ratos imunossuprimidos. (AU)