Obtencao das enzimas cpd-fotoliase e (6-4)-fotoliase e seus anticorpos para o estudo da importancia relativa das lesoes induzidas pela luz solar.

• Processo: 07/56651-9
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2008
• Data de Término da vigência: 28 de fevereiro de 2010
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Microbiologia
• Pesquisador responsável: Carlos Frederico Martins Menck
• Beneficiário: Barbara Helen Cortat Santos
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Enzimas Anticorpos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Anticorpos | Cpd-Fotoliase | Enzimas | (6-4)-Fotoliase

Resumo

A luz ultravioleta (UV) pode ser absorvida por diferentes moléculas celulares, incluindo o DNA, no qual provoca distorções estruturais. As lesões mais comuns induzidas por luz UV são o cidobutano de pirimidina (CPD) e o 6-4 pirimidina-pirimidona ((6-4)PP), Estas lesões podem ser reparadas pela fotorreativação, caracterizada por ter uma única enzima (fotoliase) que remove lesões como CPD ou (6-4)PP, empregando luz visível (300-500 nm) como fonte de energia. Foram identificados dois tipos de fotoliases que diferem por sua especificidade ao substrato: CPD-fotoliase e (6-4)-fotoliase. No trabalho anterior construímos vetores plasmidiais contendo o cDNA da CPD-fotoliase ou da (6-4)-fotoliase, sendo confirmada a expressão de ambas as proteínas em E. coli. Uma fração da proteína (6-4)-fotoliase foi obtida na forma solúvel. No entanto, a CPD-fotoliase, até o momento, só foi obtida na forma insolúvel. Neste trabalho pretendemos dar continuidade a estes experimentos buscando alternativas para obtenção de ambas as proteínas na forma solúvel (ativas). Com essas enzimas pretendemos investigar a importância dessas lesões em plasmídeos irradiados com solar, verificando, após a fotorreativação específica in vitro de um tipo de lesão, sobrevivência e mutagênese determinada após transfecção em bactérias. Além disso, com a obtenção concomitante de anticorpos para estas proteínas pretendemos, posteriormente, verificar a cinética de ligação e liberação dessas enzimas das lesões CPD e (6-4)PP em células humanas. (AU)

Publicações acadêmicas

(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)

SANTOS, Barbara Helen Cortat. Papel biológico dos dímeros de pirimidina em células humanas irradiadas com radiação UVA. 2010. Dissertação de Mestrado - Universidade de São Paulo (USP). Instituto de Biociências (IBIOC/SB) São Paulo.