Caracterizacao de lipoproteinas de leptospira interrogans expressas em escherichia coli

• Processo: 08/51545-9
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 2008
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2010
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Ana Lucia Tabet Oller do Nascimento
• Beneficiário: Rosane de Oliveira
• Instituição Sede: Instituto Butantan. Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 04/09948-8 - Clonagem e expressão de proteínas com potencial uso vacinal e em diagnóstico identificadas do genoma da bactéria Leptospira interrogans sorovar Copenhageni, AP.TEM
• Assunto(s): Clonagem Genômica funcional Expressão de proteínas Lipoproteínas Leptospira interrogans
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Clonagem | Expressao De Proteinas | Genoma Funcional | Leptospira Interrogans | Lipoproteinas

Resumo

Leptospirose é uma zoonose altamente disseminada causada por espécies patogênicas do gênero Leptospira (Levett, 2001). Os roedores são os principais reservatórios da doença nos centros urbanos. Anualmente, são relatados a Fundação Nacional de Saúde (FUNASA/MS) cerca de 5000 casos, os quais ocorrem como surtos epidêmicos nas épocas de chuva. O desenvolvimento de uma vacina é crítico, uma vez que a contenção da proliferação de roedores é pouco viável. Buscando obter proteínas antigênicas e conservadas nos diversos sorovares de Leptospira interrogans, estudos atuais têm buscado caracterizar e identificar as proteínas de superfície capazes de induzir atividade imunogênica no hospedeiro. O estudo e caracterização de proteínas envolvidas na patogenicidade de L. interrogans, como as lipoproteínas (Haake, 2000; Barbosa et al., 2006; Vieira et al., 2007), deverão fornecer dados importantes para o conhecimento dos mecanismos de infecção desta bactéria e servir como base para o desenvolvimento futuro de uma vacina contra a leptospirose. O presente projeto propõe clonar e expressar 3 proteínas da classe das lipoproteínas. Os genes selecionados, LIC12238, LIC12880 e LIC10258, codificam preditas proteínas expostas e/ou associadas à membrana externa. Estes genes serão clonados em vetor de expressão de E. coli, as proteínas recombinantes serão purificadas e inoculadas em camundongos para obtenção de soros imunes. Estes soros serão utilizados como sonda para avaliar o reconhecimento dos anticorpos por proteínas do extrato total de Leptospira spp de diferentes sorovares para estudarmos sua conservação. As proteínas presentes em diferentes leptospiras patogênicas serão avaliadas quanto à reatividade com anticorpos em soros de pacientes diagnosticados com a doença. (AU)