Novo metodo imunocromatografico para determinacao conjunta de antigeno e anticorpo em triagem ou diagnostico da hepatite c: desenvolvimento e aplicacao clinica

• Processo: 08/58612-3
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 2009
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2012
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Medicina
• Pesquisador responsável: Paulo Inácio da Costa
• Beneficiário: Flavia Regina Kenfe
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas (FCFAR). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Araraquara. Araraquara , SP, Brasil
• Assunto(s): Vírus da hepatite C
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Membrana De Nitrocelulose | Metodod Imunocromatografico | Proteina Core Recombinante | Virus Da Hepatite C

Resumo

O vírus da hepatite C (VHC) é um vírus envelopado com cerca de 50 a 70 nm de diâmetro, fita positiva de RNA e pertence ao gênero do Hepacivirus e à família Flaviridae. A detecção e quantificação do antígeno do core do VHC tem obtido sucesso em muitos ensaios, sendo considerado como um acurado e preciso marcador da replicação viral, apresentando alta sensibilidade e especificidade. Os testes utilizados para triagem sorológica devem apresentar alta. sensibilidade, detectarem a doença no estágio inicial e apresentarem baixo custo. Atualmente, todos os kits utilizados no Brasil para este diagnóstico são importados e compreendem testes sorológicos para detecção de anticorpos anti-VHC e testes moleculares, que detectam e quantificam o RNA do vírus da hepatite C (RNA-VHC). Em triagem de doadores de sangue, monitoramento de pacientes em hemodiálise e acidentes ocupacionais, o emprego de métodos qualitativos que possibilitem a determinação da replicação do VHC no período de janela imunológica, constitui uma importante ferramenta na prevenção da infecção. Os métodos atualmente utilizados baseiam-se no teste de ELISA para a detecção qualitativa de anticorpos séricos, não contribuindo para o diagnóstico na fase aguda da infecção. Em nosso trabalho, propomos o desenvolvimento de um novo método imunocromatográfico para a determinação conjunta de antígenos do core e anticorpos no sangue periférico, associados à infecção pelo VHC. Para isso, primeiramente será realizado os métodos imunocromatográficos separados, para posterior união. A precisão, exatidão e reprodutibilidade do novo método serão determinadas comparativamente aos métodos de amplificação viral (RNA-VHC/PCR; Amplicor Roche) e ELISA indireto (kit anti-HCV - ABBOTT - Murex versão 4.0). Para o desenvolvimento deste trabalho, primeiramente, será realizada a expressão de proteínas do core-VHC (procedimento já desenvolvido em nosso laboratório), seguida da produção de anticorpos monoclonais anti-core (colaboração com o laboratório do Prof. Dr. Marcelo Baruffi-FCF/USP-RP). Estes anticorpos monoclonais e as proteínas do core recombinantes serão imobilizados em membrana de nitro celulose para o desenvolvimento do teste imunocromatográfico, além de seu emprego em conjugado com ouro coloidal ou micro-esferas de látex coloridas para a captura do core-VHC e anticorpos anti-VHC, respectivamente. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

KENFE, FLAVIA REGINA; URBACZEK, ANA CAROLINA; SILVA, JULIANA CRISTINA; NEO, THALITA ATHIE; DA SILVA, FLAVIO HENRIQUE; DA COSTA, PAULO INACIO. Development of diagnostic methods and study of the immunoreactivity of a mixture of recombinant core and E2 proteins fused to GST with control serum positive for hepatitis C. Talanta, v. 110, p. 32-38, JUN 15 2013. (08/58612-3)

Publicações acadêmicas

(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)

KENFE, Flavia Regina. Método imunocromatográfico para pesquisa do anticorpo em triagem ou diagnóstico da hepatite C: desenvolvimento e aplicação clínica. 2012. Tese de Doutorado - Universidade Estadual Paulista (Unesp). Faculdade de Ciências Farmacêuticas. Araraquara Araraquara.