Caracterização funcional e estrutural do inibidor de fosfolipases A2 tipo-alfa da serpente Bothrops alternatus: clonagem, expressão e mapeamento da região responsável por sua atividade inibitória

• Processo: 08/10760-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de junho de 2009
• Data de Término da vigência: 30 de novembro de 2012
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Química de Macromoléculas
• Pesquisador responsável: Suely Vilela
• Beneficiário: Norival Alves Santos Filho
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto (FCFRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 05/54855-0 - Toxinas animais: estrutura, função e aplicações biotecnológicas, AP.TEM
• Assunto(s): Venenos de serpentes Bothrops alternatus Fosfolipases A2 Propriedades bioquímicas Mutagênese sítio-dirigida
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Bothrops alternatus | Clonagem e expressão | Inibidores de PLA2s | miotoxinas | mutagenese sítio-dirigida | PLA2s | Proteínas

Resumo

As Fosfolipases A2 constituem um dos principais componentes dos venenos de serpentes do gênero Bothrops e tem sido estudado não somente por causa de sua presença em grande quantidade, mas principalmente devido aos diversos efeitos fisiopatológicos em que está envolvida, miotoxicidade, toxicidade, indução de edema, neurotoxicidade, entre outros. É sabido que existem diversos inibidores naturais de Fosfolipases A2 de origem animal e vegetal. Esses inibidores de fosfolipases A2 isolados e caracterizados de plasmas e/ou soros de serpentes, denominados de PLIs tornaram-se importantes alvos de pesquisa, devido suas possíveis aplicações biotecnológicas, na busca de novos fármacos de interesse na clínica-médica e científica. O objetivo deste projeto é realizar a caracterização bioquímica, farmacológica, clonagem e expressão, além do mapeamento da região responsável pela atividade inibitória de um inibidor natural de fosfolipases A2 do tipo ±, isolado do plasma da espécie Bothrops alternatus. Para tanto, será realizado: 1- isolamento e a caracterização bioquímica destes inibidores; 2- caracterização funcional e propriedades inibitórias (atividades enzimáticas, farmacológicas e especificação de inibição de Fosfolipases A2) e 3- caracterização estrutural (clonagem, seqüenciamento dos cDNAs, análise das estruturas secundárias e expressão da proteína recombinante), além da realização de metagênese sitio dirigida, a qual fornecerá bases para o estudo da região específica responsável pela atividade inibitória dessas proteínas. Desta forma, novas informações em relação a esses inibidores serão conhecidas, na tentativa de melhor entender a aplicação destes inibidores como novo modelo terapêutico com ação antiofídica na neutralização de diferentes tipos de Fosfolipases A2, na suplementação da soroterapia convencional e na interação molecular com Fosfolipases A2, como possíveis modelos terapêuticos para a melhor compreensão dos mecanismos de ações que envolvem estas enzimas multifuncionais. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

SANTOS-FILHO, NORIVAL A.; SOUSA, TIAGO S.; BOLDRINI-FRANCA, JOHARA; SANTOS-SILVA, LUDIER K.; MENALDO, DANILO L.; HENRIQUE-SILVA, FLAVIO; CINTRA, ADELIA C. O.; LAURE, HELEN J.; MAMEDE, CARLA C. N.; OLIVEIRA, FABIO; et al. rBaltMIP, a recombinant alpha-type myotoxin inhibitor from Bothrops alternatus (Rhinocerophis alternatus) snake, as a potential candidate to complement the antivenom therapy. Toxicon, v. 124, p. 53-62, DEC 15 2016. (11/23236-4, 08/10760-4)

SANTOS-FILHO, NORIVAL A.; BOLDRINI-FRANCA, JOHARA; SANTOS-SILVA, LUDIER K.; MENALDO, DANILO L.; HENRIQUE-SILVA, FLAVIO; SOUSA, TIAGO S.; CINTRA, ADELIA C. O.; MAMEDE, CARLA C. N.; OLIVEIRA, FABIO; ARANTES, ELIANE C.; et al. Heterologous expression and biochemical and functional characterization of a recombinant alpha-type myotoxin inhibitor from Bothrops alternatus snake. Biochimie, v. 105, p. 119-128, OCT 2014. (11/23236-4, 08/10760-4)

Publicações acadêmicas

(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)

SANTOS FILHO, Norival Alves. Caracterização funcional e estrutural de um inibidor de fosfolipase A2 tipo-α da serpente Bothrops alternatus: Clonagem, expressão e mapeamento da região responsável pela atividade inibitória. 2013. Tese de Doutorado - Universidade de São Paulo (USP). Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto (PCARP/BC) Ribeirão Preto.