Caracterização funcional e estrutural do inibidor de fosfolipases A2 tipo-alfa da serpente Bothrops alternatus: clonagem, expressão e mapeamento da região responsável por sua atividade inibitória

Resumo

As Fosfolipases A2 constituem um dos principais componentes dos venenos de serpentes do gênero Bothrops e tem sido estudado não somente por causa de sua presença em grande quantidade, mas principalmente devido aos diversos efeitos fisiopatológicos em que está envolvida, miotoxicidade, toxicidade, indução de edema, neurotoxicidade, entre outros. É sabido que existem diversos inibidores naturais de Fosfolipases A2 de origem animal e vegetal. Esses inibidores de fosfolipases A2 isolados e caracterizados de plasmas e/ou soros de serpentes, denominados de PLIs tornaram-se importantes alvos de pesquisa, devido suas possíveis aplicações biotecnológicas, na busca de novos fármacos de interesse na clínica-médica e científica. O objetivo deste projeto é realizar a caracterização bioquímica, farmacológica, clonagem e expressão, além do mapeamento da região responsável pela atividade inibitória de um inibidor natural de fosfolipases A2 do tipo ±, isolado do plasma da espécie Bothrops alternatus. Para tanto, será realizado: 1- isolamento e a caracterização bioquímica destes inibidores; 2- caracterização funcional e propriedades inibitórias (atividades enzimáticas, farmacológicas e especificação de inibição de Fosfolipases A2) e 3- caracterização estrutural (clonagem, seqüenciamento dos cDNAs, análise das estruturas secundárias e expressão da proteína recombinante), além da realização de metagênese sitio dirigida, a qual fornecerá bases para o estudo da região específica responsável pela atividade inibitória dessas proteínas. Desta forma, novas informações em relação a esses inibidores serão conhecidas, na tentativa de melhor entender a aplicação destes inibidores como novo modelo terapêutico com ação antiofídica na neutralização de diferentes tipos de Fosfolipases A2, na suplementação da soroterapia convencional e na interação molecular com Fosfolipases A2, como possíveis modelos terapêuticos para a melhor compreensão dos mecanismos de ações que envolvem estas enzimas multifuncionais. (AU)